dầu mè
Trong môi trƣờng khoáng cơ bản là MS chúng tôi bổ sung BA và IBA để xác định sự tác động của 2 chất khích thích sinh trƣởng này đến sự tạo thành chồi của cây dầu mè.
Bảng 4.5: Ảnh hƣởng của BA và IBA đến sự tạo chồi của cây dầu mè
Nghiệm thức Môi trƣờng BA (mg/l) IBA (mg/l) Số chồi Chiều cao chồi (mm) Số lá Mô sẹo 1 MS 0,1 0,01 2,13c 4.67c 4,41d + 2 MS 0,3 0,01 2,28d 3.32b 3.81c ++ 3 MS 0,5 0,01 1,89b 3.42b 3.00b +++ 4 MS 0 0 0,87a 1.30a 1.00a - CV (%) 8,85 6,21 13,00
Trong cùng một cột, các giá trị trung bình theo sau bởi các chữ cái không cùng kí tự thì có sự khác biệt rất có ý nghĩa về mặt thông kê với mức xác suất P = 0,05.
Kết quả thí nghiệm cho thấy khi bổ sung đồng thời 2 loại kích thích sinh trƣởng thực vật (BA và IBA) số chồi trên 1 mẫu cấy gần nhƣ không tăng so với thí nghiệm chỉ bổ sung 1 chất khích thích sinh trƣởng BA (thí nghiệm 3). Nhƣng chiều cao chồi đƣợc cải thiện đáng kể. Điều này là phù hợp vì khi có sự hiện diện của auxin, cytokinin kích thích mạnh hơn sự phân chia tế bào (Dƣơng Công Kiên, 2002).
Khi có sự hiện diện của IBA ở mức thấp 0,01 mg/l, việc tăng nồng độ BA từ 0,1 mg/l đến 0,5 mg/l không làm tăng số chồi, chiều cao chồi cũng nhƣ số lá trên 1 mẫu cấy. Kết quả thí nghiệm cho thấy ở nghiệm thức thứ nhất - chỉ bổ sung BA ở nồng độ 0,1 mg/l và IBA 0,01 mg/l thì kết quả tạo chồi cầy dầu mè tỏ ra vƣợt trội hơn các nghiệm thúc khác về cả 3 chỉ tiêu: số chồi 2,13 chồi/mẫu cầy; chiều cao chồi cao nhất 4,67 mm, số lá 4,41 lá/mẫu cấy. Thí nghiệm cũng cho thấy khi tăng nồng độ BA mô sẹo tạo ra trên các mẫu càng nhiều.
Từ đó chúng tôi kết luận: môi trƣờng thích hợp để nuôi cấy cây dầu mè invitro là môi trƣờng MS bổ sung BA (0,1 mg/l) và IBA (0,01 mg/l).
Hình 4.5: Ảnh hƣởng của BA và IBA đến sụ tạo chồi của cây dầu mè
1: Môi trƣờng MS + IBA (0,01) + BA (0,1) 2: Môi trƣờng MS + IBA (0,01) + BA (0,3) 3: Môi trƣờng MS + IBA (0,01) + BA (0,5) 1 2 3
4.5. Thí nghiệm 5: Nuôi cấy tạo rễ cây dầu mè invitro
Mục tiêu là xác định môi trƣờng thích hợp cho sự tạo rễ của cây dầu mè. Trong nuôi cấy mô, việc bổ sung các auxin vào môi trƣờng nuôi cấy cho hiệu quả kích thích cây khỏe mạnh, tạo nhiều rễ, phát triển tốt (Banerjee và Delanghe, 1985).
Bảng 4.6: Tác động của IBA đến việc tạo rễ cây dầu mè in vitro
Nghiệm thức Môi trƣờng IBA (mg/l) Số rễ Chiều dài rễ (mm) 1 MS 0,1 2,88b 14,46c
2 MS 0,3 5,50c 15,07c
3 MS 0,5 6,38d 11,63b
4 MS 0 0,00a 0,00a CV (%) 10,68 21,00
Trong cùng một cột, các giá trị trung bình theo sau bởi các chữ cái không cùng kí tự thì có sự khác biệt rất có ý nghĩa về mặt thông kê với mức xác suất P = 0,05.
Tác động của IBA đến việc tạo rễ của cây dầu mè in vitro là khá nhanh và mạnh. Các nghiệm thức 2 và 3 sau khi cấy mẫu khoảng 1 tuần cây bắt đầu mọc rễ , trong nghiệm thức 1 rễ mọc chậm hơn khoảng 2 – 3 ngày. Rễ cây mọc trên các môi trƣờng có màu trắng sau khoảng 2 tuần có màu nâu sậm.
Từ kết quả thí nghiệm trên bảng 4.5 cho thấy nghiệm thức 3 là nghiệm thức cho kết quả tốt nhất. Số rễ tạo ra trên mỗi mẫu cấy là nhiều nhất và chiều dài rễ so với 2 nghiệm thức còn lại có sự khác biệt không nhiều.
Hình 4.6: Nuôi cấy tạo rễ cây dầu mè in vitro
1: Môi trƣờng MS + IBA 0,1 (mg/l) 2: Môi trƣờng MS + IBA 0,3 (mg/l) 3: Môi trƣờng MS + IBA 0,5 (mg/l)
Hình 4.7: cây dầu mè in vitro
3 2
Chƣơng 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1. Kết luận
Từ kết quả thực nghiệm, chúng tôi có một số kết luận sau:
Mẫu cây dầu mè thực sinh đƣợc vô trùng tốt nhất trong điều kiện Natri hypochlorit 10% trong khoảng thời gian 45 phút.
Môi trƣờng khoáng cơ bản thích hợp để nuôi cấy mô cây dầu mè in vitro là môi trƣờng MS.
Môi trƣờng thích hợp để nhân chồi cây dầu mè là môi trƣờng MS bổ sung BA (0,1 mg/l) và IBA (0,01 mg/l).
Môi trƣờng thích hợp cho sự ra rễ là môi trƣờng MS bổ sung IBA nồng độ 0,3 mg/l.
5.2. Đề nghị
Cần nghiên cứu thêm môi trƣờng để nuôi cấy cây dầu mè từ sau khi ra rễ cho đến khi cây đủ lớn để đƣa ra vƣờn ƣơm, theo dõi sinh trƣởng cây trong giai đoạn vƣờn ƣơm đến khi đạt tiêu chuẩn đem trồng.
Xây dụng hoàn chỉnh qui trình nhân giống invitro và trên vƣờn ƣơm cây dầu mè.
Chƣơng 6. TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Bùi Bá Bổng, 1995. Nhân giống cây bằng nuôi cấy mô. Sở khoa học công nghệ môi trƣờng An Giang.
2. Trần Thị Dung, 2003, Bài giảng nuôi cấy mô tế bào thực vật, Trƣờng Đại học Nông Lâm TP.HCM.
3. Dƣơng Công Kiên, 2002. Nuôi cấy mô thực vật. Nhà xuất bản Đại Học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh.
4. Nguyễn Đức Lƣợng, 2002. Công nghệ tế bào. Nhà xuất bản Đại Học Quốc Gia TP. Hồ Chí Minh
5. Trần Văn Minh, 2004. Công nghệ sinh học – Giáo trình cao học – nghiên cứu sinh. Trƣờng đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh, 933 trang.
6. Khƣu Hoàng Minh, 2006. Nuôi cấy mô cây Trai Nam Bộ (Fagraea cochinchinensis A.Chev.). Luận văn kĩ sƣ Công Nghệ Sinh Học, Trƣờng Đại học Nông Lâm Tp. HCM.
7. Nguyễn Văn Uyển, 1996. Những phương pháp công nghệ sinh học thực vật. Nhà xuất bản Nông nghiệp, tập 1, 2.
8. Bùi Trang Việt, 2000. Sinh lý thực vật đại cương. Đại học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh, 333 trang
9. NIIR Board of Consultants and Engineers. 2006. The Complete Book on Jatropha (Bio-Diesel) with Ashwagandha, Stevia, Brahmi & Jatamansi Herbs (Cultivation, Processing & Uses) – Asia Pacific Business Press Inc.
10. Heller, J. (1996). Physic nut. Jatropha curcas L. Promoting the conservation and use of underutilized and neglected crops. 1. Institute of Plant Genetics and Crop Plant Research, Gatersleben, International Plant Genetic Resources Institute, Rome.
11. M. Sujatha & N. Mukta, 1995. Morphogenesis and plant regeneration from tissue cultures of Jatropha curca.Plant Cell, Tissue and Organ Culture 44: 135 – 141, 1996
12. M. Sujatha, H.P.S. Makkar and K. Becker, 2005. Shoot bud proliferation from axillary nodes and leaf sections of non-toxic Jatropha curcas L. Plant Growth Regulation(2005) 47: 83 – 90.
13. Nannapat Thepsamran, Chockpisit Thepsithar and Aree Thongpukdee. In vitro
multiple shoot induction of physic nut (Jatropha curcas). Nakhon Pathom
73000, Thailand.
14. Timir baran Jha, Priyanka Mukherjee and Mukul Manjari Datta, 2007. Somatic embryogenesis in Jatropha curcas Linn., an important biofuel plant. Springer Japan 1:135 -140, 2007. INTERNET 1. http://www.cyberlipid.org/glycer/glyc0051.htm 2. http://www.dongnai.gov.vn/thong_tin_KTXH/Khoa_hoc_cong_nghe/mlnew s.2006-10-25.0403019214/view?searchterm=curcas 3. http://vnexpress.net/Vietnam/Khoa-hoc/2006/07/3B9EBF6B/?q=1 4. http://www.agbiotech.com.vn/vn/2print.php?key=728
PHỤ LỤC Thí nghiệm 1 - 1: Vô trùng mẫu hạt cây dầu mè
One-Way Analysis of Variance
---
Data: TN12._GT
Level codes: TN12.NT
Labels:
Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD
Analysis of variance
---
Source of variation Sum of Squares d.f. Mean square F-ratio Sig. level ---
Between groups .1145915 11 .0104174 9.771 .0000
Within groups .0202576 19 .0010662
---
Total (corrected) .1348491 30
0 missing value(s) have been excluded.
Table of means for TN12._GT by TN12.NT
---
Stnd. Error Stnd. Error 95 % LSD
Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean --- 1 2 .0500000 .0118000 .0230889 .0158204 .0841796 2 3 .1833333 .0057877 .0188520 .1554258 .2112409 3 3 .1666667 .0075922 .0188520 .1387591 .1945742 4 3 .2083333 .0389930 .0188520 .1804258 .2362409 5 2 .1000000 .0234500 .0230889 .0658204 .1341796 6 3 .1083333 .0136290 .0188520 .0804258 .1362409 7 3 .2083333 .0101583 .0188520 .1804258 .2362409 8 3 .2678571 .0255744 .0188520 .2399496 .2957647 9 2 .1000000 .0235640 .0230889 .0658204 .1341796 10 2 .1954545 .0098225 .0230889 .1612749 .2296342 11 3 .2037037 .0189627 .0188520 .1757962 .2316113 12 2 .2500000 .0067400 .0230889 .2158204 .2841796 --- Total 31 .1751804 .0058646 .0058646 .1664987 .1838620
Multiple range analysis for TN12._GT by TN12.NT
---
Method: 95 Percent LSD
Level Count Average Homogeneous Groups
--- 1 2 .0500000 X 5 2 .1000000 X 9 2 .1000000 X 6 3 .1083333 X 3 3 .1666667 X 2 3 .1833333 X 10 2 .1954545 XX 11 3 .2037037 XX 4 3 .2083333 XX 7 3 .2083333 XX 12 2 .2500000 XX
8 3 .2678571 X
---
contrast difference limits
1 - 2 -0.13333 0.06240 * 1 - 3 -0.11667 0.06240 * 1 - 4 -0.15833 0.06240 * 1 - 5 -0.05000 0.06836 1 - 6 -0.05833 0.06240 1 - 7 -0.15833 0.06240 * 1 - 8 -0.21786 0.06240 * 1 - 9 -0.05000 0.06836 1 - 10 -0.14545 0.06836 * 1 - 11 -0.15370 0.06240 * 1 - 12 -0.20000 0.06836 * 2 - 3 0.01667 0.05582 2 - 4 -0.02500 0.05582 2 - 5 0.08333 0.06240 * 2 - 6 0.07500 0.05582 * 2 - 7 -0.02500 0.05582 2 - 8 -0.08452 0.05582 * 2 - 9 0.08333 0.06240 * 2 - 10 -0.01212 0.06240 2 - 11 -0.02037 0.05582 2 - 12 -0.06667 0.06240 * 3 - 4 -0.04167 0.05582 3 - 5 0.06667 0.06240 * 3 - 6 0.05833 0.05582 * 3 - 7 -0.04167 0.05582 3 - 8 -0.10119 0.05582 * 3 - 9 0.06667 0.06240 * 3 - 10 -0.02879 0.06240 3 - 11 -0.03704 0.05582 3 - 12 -0.08333 0.06240 * 4 - 5 0.10833 0.06240 * 4 - 6 0.10000 0.05582 * 4 - 7 0.00000 0.05582 4 - 8 -0.05952 0.05582 * 4 - 9 0.10833 0.06240 * 4 - 10 0.01288 0.06240 4 - 11 0.00463 0.05582 4 - 12 -0.04167 0.06240
Thí nghiệm 1 – 2: Vô trùng mẫu chồi cây dầu mè
One-Way Analysis of Variance
---
Data: TN11._GT
Level codes: TN11.NT
Labels:
Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD
Analysis of variance
---
Source of variation Sum of Squares d.f. Mean square F-ratio Sig. level ---
Between groups .0119997 11 .0010909 4.751 .0007
Within groups .0055110 24 .0000229
---
Total (corrected) .0175108 35
0 missing value(s) have been excluded.
Table of means for TN11._GT by TN11.NT
---