Đây có thể là băng protein được biểu hiện do cũng có kích thước ~16,5 KDa tương đương với kích thước của đoạn 27aa_LTBđược tính trên lý thuyết so với băng đối chứng không có băng này. Tuy nhiên để khẳng định đoạn protein trên có đúng là được biểu hiện hay không và tiến tới là tinh sạch protein thì trong thời gian tới chúng tôi tiến hành lai miễn dịch với kháng thể đơn dòng đặc hiệu với 6 histidine bằng phương pháp western blot.
3.5. Biểu hiện tạm thời gen 27aa_LTB trong thực vật
3.5.1 Thiết kế vector biểu hiện gen 27aa_LTB trong thực vật
Nhằm tăng cường biểu hiện trong tế bào thực vật, đoạn peptit kháng nguyên được gắn thêm trình tự KDEL, có chức năng dẫn truyền các bản mã sao tái tổ hợp vào hệ lưới nội chất. Bên cạnh đó, chúng tôi cũng tiến hành gắn bổ sung cmyc vào peptide kháng nguyên. Mục đích là tạo ra đoạn tag thuận tiện cho việc phát hiện protein tái tổ hợp bằng phương pháp lai miễn dịch sau này. Vector pTRA mang đoạn KDEL và cmyc được cắt mở vòng bằng
BamHI/NotI và lai với đoạn 27aa_LTB đã được cắt từ vector pBT cũng bằng enzyme trên. Để kiểm tra các plasmid tái tổ hợp chính là dòng pTRA_27aa_LTB_cmyc_KDEL mong muốn, plasmid được tách từ những khuẩn lạc sống sót trên môi trường LB có bổ sung kháng sinh chọn lọc và cắt bằng enzyme giới hạn HindIII. Theo tính toán lý thuyết, HindIII sẽ cắt plasmid tái tổ hợp thành hai đoạn như sau: đoạn 1 dài 1100bp gồm đoạn 27aa_LTB_cmyc_KDEL, đoạn 2 dài 2600bp là phần còn lại của vector pTRA.
Hình 3.8. Điện di sản phẩm cắt plasmid pTRA_27aa_LTB bằng HindIII