3. ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYấN LIỆU VÀ PH ƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
3.4.3. Ứng dụng hormone và chế phẩm hormone sinh sản
3.4.3.1. Qui trỡnh I: GnRH-PG-PMSG GnRH (Suprefact, Buserelin) 100àg
PG (Prosolvin 2ml tương đương với 15 mg Luprostiol)
PMSG:(Folligon): hormone huyết thanh ngựa chửa tinh sạch: 500 UI
Pha hoàng thể Phối giống 1 7 9 GnRH (100àg) 2ml Prosolvin + 500 UI PMSG Ngày
Bũ đó được kiểm tra khụng bị cỏc bệnh sinh sản, khụng cú cỏc vấn đề về dinh dưỡng, khỏm qua trực tràng kiểm tra thấy cú thể vàng ở một trong hai buồng trứng là rất tốt cho ỏp dụng qui trỡnh nàỵ Tiến hành tiờm 2ml chứa
44
trứng, coi đú là ngày thứ nhất, bảy ngày sau, tiờm 1 mũi PG (2ml prosolvin, Intervet), cựng lỳc tiờm 500 UI PMSG. Tất cả cỏc mũi tiờm đều tiờm cơ mụng. Sau GnRH cú thể cú một số bũ động dục, trong qui trỡnh thử nghiệm chỳng tụi khụng tiến hành dẫn tinh, mà chỉ dẫn tinh sau khi tiờm mũi PG. Bũ động dục dự tớnh sau 24 đến 96 giờ tập trung 48-72 giờ. Thớ nghiệm tiến hành trờn 28 bũ.
3.4.3.2. Qui trỡnh II: GnRH-PG-E (Heatsynch) GnRH (Suprefact, Buserelin) 100àg
PG (Prosolvin 2ml tương đương với 15 mg Luprostiol) E: Oestradiol Benzoat 7,5 mg (5ml, bảo quản trong dầu)
Pha hoàng thể Phối giống
1 7 9
GnRH
(100àg) + 7,5 mg Oestradiol Benzoate 2ml Prosolvin Ngày Bũ được khỏm tử cung và buồng trứng nếu khụng cú viờm hoặc đó điều trị viờm, cú thể vàng trờn 1 trong hai buồng trứng là cú thể ỏp dụng. Tiến hành tiờm 2ml chứa 100àg GnRH vào ngày khỏm thấy cú thể vàng, coi đú là ngày thứ nhất. Bảy ngày sau tiờm 1 mũi PG (2ml prosolvin, Intervet, Italia), cựng lỳc tiờm 7,5 mg oestradiol benzoatẹ Tất cả cỏc mũi tiờm đều tiờm cơ mụng. Sau GnRH cú thể cú một số bũ động dục, trong qui trỡnh thử nghiệm chỳng tụi khụng tiến hành dẫn tinh, mà chỉ dẫn tinh sau khi tiờm mũi PG. Bũ động dục dự tớnh sau 24 đến 96 giờ tập trung 48 - 72 giờ.
Cỏc bũ chưa được dẫn tinh sau trong vũng 48 - 96 giờ tiến hành dẫn tinh sau đú nếu thấy tự động dục trở lại hoặc tiờm 1 mũi PG vào 7 - 9 ngày sau mũi PG thứ nhất và dẫn tinh như thường lệ. Qui trỡnh này thực hiện trờn 24 bũ.
46
3.4.3.3. Qui trỡnh III: PG - PG - HCG (Weekly PG Program) PG (Prosolvin 2ml tương đương với 15 mg Luprostiol) HCG (Corulon): 2.000 UI 0 1 7 Kết thỳc động dục 2ml Prosolvin 2ml Prosolvin + 2.000 UI HCG Ngày
Bũ ỏp dụng trong qui trỡnh này là cỏc bũ cú chu kỳ khụng bị suy dinh dưỡng và khụng bị viờm đường sinh dục. Để biết điều này bũ được khỏm buồng trứng qua trực tràng nếu thấy cú thể vàng trờn một trong hai buồng trứng là tốt. Bũ khụng cú chu kỳ cũng cú thể ỏp dụng nhưng thường kết quả kộm hơn.
Mũi tiờm 2ml PG lần đầu cú thể tiến hành vào ngày bất kỳ hoặc sau động dục ớt nhất 3 ngày và tớnh là ngày thứ nhất. Như vậy nếu bũ khụng trả lời thỡ chứng tỏ bũ đang ở giai đoạn trong vũng từ 1 đến 4 ngày sau động dục. Cũn nếu bũ đang ở pha hoàng thể từ 4 ngày trở đi thỡ mũi PG này sẽ gõy thoỏi húa thể vàng và bũ động dục trong những ngày sau đú. Mũi PG thứ hai được tiến hành 7 ngày sau mũi thứ nhất cựng với một mũi tiờm 2.000 UI hCG. Với cỏch tiờm như vậy trựng vào giai đoạn độc tụn nang hCG kớch thớch phỏt triển nang đến giai đoạn rụng trứng trong khi PG gõy thoỏi hoỏ thể vàng mới hỡnh thành.
Dẫn tinh ở lần động dục sau mũi PG thứ 2 cho kết quả tối ưu vỡ biết chắc cú ớt nhất một súng nang cho nang độc tụn vào giai đoạn nàỵ
47
3.4.3.4. Qui trỡnh IV: SMB-PG-PMSG
0 1 7 9
Kết thỳc
động dục Oestradiol Benzoate SMB + 7,5 mg + PMSG 500 UI 2ml Prosolvin gSMB ỡ bỏ Ngày SMB : Synchno-mate B, đõy là một dạng thuốc tẩm viờn nhựa mềm cú thành phần hoạt chất là norgestomet, một loại dẫn xuất của progesterone khụng dễ hỏng trong điều kiện nhiệt độ thường và cú hoạt lực lớn hơn progesterone nhiều lần. Được cấy vào gốc tai bũ tốt nhất sau động dục ớt nhất 3 ngày, viờn SMB hàng ngày tiết vào mỏu bũ một lượng progesterone tương đương như một thể vàng hoạt động ở mức cao nhất. Như vậy trong mỏu bũ luụn duy trỡ một mức progesterone cao, cú tỏc dụng ức chế cỏc xung LH, làm cho động vật khụng thể động dục và kộo dài quỏ trỡnh độc tụn nang. Trước thời điểm thỏo bỏ viờn cấy hai ngày người ta tiờm cho động vật một mũi PG và 500 UI PMSG. Mũi PG cú tỏc dụng làm thoỏi hoỏ thể vàng nội tại của buồng trứng, cũn PMSG kớch thớch phỏt triển nang. Do vậy lỳc thỏo viờn cấy tai cũng là lỳc mức progesterone đột ngột giảm xuống và gõy phản ứng động dục và rụng trứng. Do kết hợp nhiều tỏc dụng nờn phản ứng động dục xảy ra mạnh 18 - 24 giờ sau khi thỏo viờn cấy tai và chắc chắn đi kốm rụng trứng.
Viờn cấy tai cú tờn thương mại là Synchronomat B (SMB) hoặc Crestar cả hai loại đều bỏn kốm với liều Oestradiol valerate (5mg).
Sử dụng cựng nguyờn tắc là tỏc dụng trường diễn progesterone cũn cú cỏc dạng viờn đặt õm đạo như:
- PRID: 10 - 12 ngày - CIDR: 10 - 12 ngàỵ
48
Bũ thớ nghiệm tốt nhất là nờn biết là bũ cú chu kỳ bằng cỏch kiểm tra thể vàng hoặc là theo dừi cỏc chu kỳ động dục trước, tuy nhiờn qui trỡnh này cũng cú thể ỏp dụng đối với bũ khụng cú chu kỳ. Bũ được tiến hành cấy viờn SMB vào gốc tai nhờ một sỳng cấy (cú bỏn kốm với thuốc) sau khi đó khử trựng cục bộ bằng cồn 900 , cựng lỳc tiờm cơ mụng toàn bộ lượng thuốc trong lọ đi kốm (5ml chứa 5mg oestradiol valerate). Ngày này được tớnh là ngày thứ nhất. Bảy ngày sau tiờm cơ một liều PG (2ml prosolvin) và một liều 500 UI PMSG (Folligon). Ngày thứ 9 (hai ngày sau PG) thỏo bỏ viờn cấy taị 18 đến 20 giờ sau khi thỏo viờn cấy tai tiến hành dẫn tinh. Mặc dự trong hướng dẫn qui trỡnh cho phộp tiến hành dẫn tinh khụng cần quan sỏt động dục nhưng trong thực tế thớ nghiệm tập trung quan sỏt động dục sau khi thỏo viờn cấy tai và dẫn tinh 18 - 20 giờ sau khi bắt đầu động dục vẫn là tối ưụ
Một bũ động dục ngầm vẫn tiến hành dẫn tinh cựng đợt. 3.4.3.5. Qui trỡnh V: PG+GnRH – PG+GnRH (cải tiến Ovsynch) 1 7 2ml Prosolvin 100 àg GnRH 2ml Prosolvin 100 àg GnRH Ngày
Bũ sử dụng cho qui trỡnh này phải khụng bị viờm nhiễm đường sinh dục, cú thể trạng tương đối và tốt nhất là bũ cú chu kỳ (cú thể vàng ở một trong hai buồng trứng), tuy nhiờn cũng cú thể sử dụng cỏc bũ khụng cú chu kỳ với điều kiện buồng trứng và tử cung khụng bị thiểu năng. Cỏc bũ này được tiờm 2ml Prosolvin cú hoà sẵn với 100àg GnRH, ngày tiờm được tớnh là ngày thứ nhất. 7 ngày sau tiờm 2ml Prosolvin và 100àg GnRH, động dục sẽ xảy ra trong vũng 48-72 giờ, tập trung quan sỏt và dẫn tinh như trường hợp bũ động dục tự nhiờn.
49