Phỏt hiện khỏng thể và xỏc ủịnh hiệu giỏ khỏng thể bằng phản ứng Ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI - Hemoglutination Inhibition).
Huyết thanh kiểm tra: Huyết thanh gà khụng cần xử lý bằng RDE, huyết thanh vịt, ngan cú thể xử lý bằng RDE ủể chống hiện tượng ức chế ngưng kết khụng ủặc hiệu và xử lý hồng cầu ủể chống hiện tượng ngưng kết hồng cầu giả. Phương phỏp xử lý huyết thanh xin xem Phụ lục 7.
Chuẩn bị khỏng nguyờn:
- Chuẩn ủộ khỏng nguyờn - Xỏc ủịnh hiệu giỏ HA bằng phản ứng ngưng kết hồng cầu HẠ
- Pha khỏng nguyờn chuẩn 4HA/25 àl: 1 mẫu huyết thanh kiểm tra cần 175 àl khỏng nguyờn. Tớnh lượng khỏng nguyờn cần dựng cho số mẫu huyết thanh cộng thờm 1ml ủể ủảm bảo lượng khỏng nguyờn dựng cho phản ứng.
- Chuẩn ủộ khỏng nguyờn 4HA trước khi tiến hành phản ứng HỊ
Tiến hành phản ứng HI:
- Nhỏ 25 àl PBS vào cỏc giếng của ủĩa 96 giếng. - Nhỏ tiếp 25 àl khỏng huyết thanh vào giếng ủầu tiờn.
- Pha loóng khỏng huyết thanh theo cơ số 2, bằng cỏch chuyển 25 àl khỏng huyết thanh từ giếng 1 sang giếng 2 và tuần tự ủến giếng 11 và bỏ ủi 25
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………49
- Nhỏ 25 àl khỏng nguyờn 4HA ủó chuẩn bị vào cỏc giếng từ giếng 1 - 11. Thờm 25 àl PBS vào hàng ủối chứng hồng cầu (giếng 12). Lắc ủĩa và ủ ở nhiệt ủộ phũng 30 phỳt.
- Nhỏ 25 àl dung dịch hồng cầu vào tất cả cỏc giếng của ủĩa, lắc ủềụ ðể ủĩa ở nhiệt ủộ phũng 40 phỳt.
ðọc kết quả:
Phản ứng (+) dương tớnh: Hồng cầu lắng xuống ủỏỵ
Hiệu giỏ HI của mẫu ủược tớnh ở ủộ pha loóng huyết thanh cao nhất cũn cú hiện tượng ức chế ngưng kết hồng cầụ Huyết thanh ủược coi là dương tớnh khi cú hiệu giỏ huyết thanh ≥ 1/16. Huyết thanh ủối chứng õm tớnh phải cú hiệu giỏ ≤ 1/4.
Phản ứng (-) õm tớnh: Hồng cầu bị ngưng kết.
Chỳ ý: Khi kiểm tra huyết thanh cỏc loài khỏc khụng phải là gà nờn cú 1 giếng chỉ cú huyết thanh và hồng cầu ủể kiểm tra hiện tượng ngưng kết hồng cầu khụng ủặc hiệụ Nếu phỏt hiện thấy cú ngưng kết hồng cầu khụng ủặc hiệu xảy ra với mẫu huyết thanh nào cần xử lý lại mẫu huyết thanh ủú và kiểm tra lại bằng phản ứng HỊ