cầu - HI
- Pha khỏng nguyờn 4HA/25 àl: Lấy ủộ pha loóng cuối cựng cú phản ứng ngưng kết hồng cầu chia cho 4.
Vớ dụ: Hiệu giỏ HA của dịch niệu mụ là 1/128. ðơn vị 4 HA = 128: 4 = 32.
Như vậy sẽ trộn 1 phần dịch nước trứng với 31 phần PBS ủể ủạt ủược dung dịch khỏng nguyờn 4HẠ
- Chuẩn ủộ khỏng nguyờn 4 HA:
Sau khi pha, khỏng nguyờn 4HA phải ủược chuẩn ủộ lạị Tiến hành: Như phản ứng HẠ
+ Pha chuẩn: Kết quả ngưng kết xảy ra ở 2 giếng ủầụ + Pha khụng chuẩn:
Khỏng nguyờn ủặc: Nếu ngưng kết ủến giếng thứ 3 tức là thừa khỏng nguyờn. Như vậy, khỏng nguyờn 8HA phải ủược pha loóng (cú thể gấp ủụi) ủể cú ngưng kết ủến giếng thứ 2.
Khỏng nguyờn loóng: Nếu ngưng kết ủến giếng thứ 1 tức là thiếu khỏng nguyờn, cú thể thờm một lượng khỏng nguyờn (bằng với lượng khỏng nguyờn pha ban ủầu) ủể cú ngưng kết ủến giếng thứ 2.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………41
- Tiến hành phản ứng HI: Trờn 1 ủĩa cú thể tiến hành phản ứng HI với nhiều khỏng huyết thanh của cỏc subtype khỏc nhaụ
+ Nhỏ 25 àl PBS vào cỏc giếng của ủĩa 96 giếng. + Nhỏ tiếp 25 àl khỏng huyết thanh vào giếng ủầu tiờn.
+ Pha loóng khỏng huyết thanh theo cơ số 2, bằng cỏch chuyển 25 àl khỏng huyết thanh từ giếng 1 sang giếng 2 và tuần tự ủến giếng 11 và bỏ ủi 25
àl cuối cựng.
+ Nhỏ 25 àl khỏng nguyờn 4HA ủó chuẩn bị vào cỏc giếng từ giếng 1 - 11. Thờm 25 àl PBS vào hàng ủối chứng hồng cầu (giếng 12).
+ Lắc ủĩa và ủ ở nhiệt ủộ phũng 30 phỳt.
+ Nhỏ 25 àl dung dịch hồng cầu vào tất cả cỏc giếng của ủĩa, lắcủềụ + ðể ủĩa ở nhiệt ủộ phũng 40 phỳt.
ðọc kết quả:
- Phản ứng (+) dương tớnh: Hồng cầu lắng xuống ủỏỵ Như vậy, virus phõn lập và khỏng huyết thanh chuẩn tương ứng với nhaụ
- Xỏc ủịnh subtype: Một virus phõn lập ủược xỏc ủịnh subtype khi nú phản ứng với một khỏng huyết thanh chuẩn hiệu giỏ cao hơn 4 lần so với cỏc khỏng huyết thanh chuẩn khỏc. Hiệu giỏ càng cao chứng tỏ sự tương ủồng của virus phõn lập với khỏng huyết thanh chuẩn càng lớn.