e. Tetracycline là nhóm kháng sinh phổ tương ñố ig ần nhau do Streptomyces spp sinh ra.
2.2.1. Phương pháp phân lập xạ khuẩn
Hai phương pháp phân lập ñã ñược sử dụng trong ñề tài là phương pháp sấy khô
(Nonomura et al, 1969) và phương pháp ly tâm-hoàn ẩm (rehydration–centrifugation)
(Hayakawa et al, 2000).
Trong phương pháp sấy khô, các mẫu ñất và rác ñược làm khô ở nhiệt ñộ phòng trong 5-7 ngày rồi xử lý ở nhiệt ñộ 90 – 110 0C trong 10 – 30 phút ñể loại bỏ các vi khuẩn không sinh bào tử (hầu hết các bào tử xạ khuẩn không chết ở ñiều kiện này). Tiếp theo, các mẫu ñược trải lên môi trường HV (môi trường thạch có humic acid và vitamin: humid acid 1 g, CaCO3 0,02 g; FeSO4.7H2O 0,01 g; KCl 1,71 g; MgSO4.7H2O 0,05 g; Na2HPO4
0,5 g, cycloheximine 50 mg, nalidixic acid 20 mg, kabicidine 14 mg, thạch 18 g, H2O 1 L, pH 7,2) và nuôi ở 28 – 300C trong 7 ñến 14 ngày. Các khuẩn lạc xạ khuẩn với hình thái khác nhau ñược nhặt và chuyển sang môi trường YS (môi trường thạch chứa dịch chiết
nấm men và tinh bột: glucose 10 g, cao nấm men 2 g, thạch 17 g, H2O 1 L, pH 7,0) ñể tạo sinh khối tế bào nhiều hơn.
Phương pháp ly tâm-hoàn ẩm (RC) là một phương pháp phân lập ñặc hiệu với xạ khuẩn ñộng. Các bước tiến hành như sau:
− Lấy 0.5 g mẫu ñất và rác ñã ñược phơi khô cho vào bình tam giác 100 ml, nhẹ nhàng thêm 50 ml ñệm phosphate 10 mM (pH = 7) chứa 10% dịch chiết ñất (trộn 500 g ñất với 500 ml nước cất trong bình tam giác, khử trùng ở 121°C trong 30 phút, lọc hai lần, khử trùng và bảo quản ở 4°C).
− ðậy bình bằng giấy nhôm và nuôi ở 30°C trong 90 phút ñể giải phóng các ñộng bào tử (motile zoospores).
− Chuyển 8 ml dịch nổi vào ống falcon 15 ml, ly tâm ở nhiệt ñộ phòng trong 20 phút ở 1,500 g ñể loại bỏ các xạ khuẩn không ñộng. ðể các ống ổn ñịnh trong 30 phút. − Lấy 1 ml dịch nổi rồi pha loãng bậc 2 bằng nước sạch ñã khử trùng, lấy 0,2 ml của
các bậc pha loãng 10-2, 10-3 và 10-4 cho lên ñĩa môi trường thạch HV và nuôi ở 28 – 30°C trong 2 – 3 tuần ñể tạo khuẩn lạc.
− Nhặt các khuẩn lạc ñược tạo thành và chuyển vào ñĩa môi trường thạch HV mới ñể thuần khiết lần thứ hai rồi chuyển sang môi trường thạch YS ñể tạo sinh khối. Tất cả các chủng xạ khuẩn phân lập bằng hai phương pháp nói trên ñều ñược lưu giữ ở -80°C trong dung dịch glycerol 20% tại Bảo tàng giống chuẩn vi sinh vật (Vietnam Type Culture Collection-VTCC), Viện Vi sinh vật và Công nghệ sinh học, ðại học Quốc gia Hà Nội.