- Chuẩn bị trứng:
Trứng sau khi được nuôi thành thục trong môi trường nuôi tại phòng Công nghệ phôi sẽ được chúng tôi tiến hành TTON. Trứng được đánh giá là
thành thục khi quan sát thấy sự xuất hiện của thể cực thứ nhất (nhiễm sắc thể ở trạng thái Metaphase II).
- Chuẩn bị tinh trùng:
Để tiến hành IVF, chúng ta có thể sử dụng tinh tươi hoặc tinh đông lạnh, Trong nghiên cứu này chúng tôi sử dụng tinh đông lạnh dạng cọng rạ,
Trước khi thụ tinh, tinh cọng rạ bảo quản trong nitơ lỏng ở -1960C được giải đông trong nước ấm 370C dưới 1 phút. Sau đó tinh trùng được “kiện toàn năng lực thụ tinh” bằng cách xử lý theo phương pháp ly tâm:
Cách tiến hành:
Đưa tinh trùng vào ống ly tâm, sau đó đưa môi trường nước rửa trứng lợn vào để rửa tinh trùng, đảo đều và đưa vào máy ly tâm 10 phút, tốc độ 2000xg, thu lấy phần lắng dưới đáy, Sau đó cho môi trường rửa tinh TALP-2 vào để pha loãng, đảo đều và cho vào tủ ấm 37-380C trong 10-15 phút. Tinh trùng lúc này đã sẵn sàng cho thụ tinh.
Sau khi xử lý tinh trùng xong, tiến hành khảo sát đánh giá chất lượng tinh dựa vào các chỉ tiêu: Hoạt lực tinh trùng tiến thẳng, nồng độ tinh trùng, tỷ lệ sống của tinh trùng, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình.
Nồng độ tinh trùng sau khi xử lý đạt từ 5,105-106 tinh trùng/ml là đạt yêu cầu cho TTON.
- Phương pháp TTON: tạo giọt thụ tinh đã được chuẩn bị trước 2h, trứng được thụ tinh là những trứng loại A, B (có thể tách hay không tách culumus). Mỗi giọt thụ tinh đưa vào từ 10-15 trứng, sau đó đưa tinh trùng đã xử lý vào (5,105-106 tinh trùng/10-15 trứng). Đưa mẫu vào trong tủ nuôi ở 390C, 5% CO2, độ ẩm bão hòa trong 24h.
Phương pháp xử lý số liệu:
Số liệu thu được được xử lý bằng phần mềm Microsoft Excel-ANOVA,
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN