Phương pháp đánh giá một số chỉ tiêu sinh học tinh dịch lợn thu được

- Lượng tinh thu được (V: ml)

Theo phương pháp của Milovanov (1962), Chemineau (1991) dùng ống đong, cốc đong có chia độ sẵn, đặt thăng bằng ngang tầm mắt và đọc kết quả ở mặt cong dưới của tinh dịch.

- Hoạt lực tinh trùng tiến thẳng (A: %)

Theo phương pháp của Milovanov (1962), Chemineau (1991), cách tiến hành:

Dùng đũa thủy tinh sạch, lấy 1 giọt tinh dịch nhỏ lên phiến kính khô, sạch, ấm (35-370C). Dùng 1 lamen sạch, ấm đặt lên giọt tinh dịch sao cho giọt tinh dịch được dàn đều ra 4 cạnh của lamen và không lẫn bọt khí.

Đặt tiêu bản lên kính hiển vi độ phóng đại 400 lần, ước lượng tỷ lệ phần trăm tinh trùng tiến thẳng (theo kinh nghiệm) trong vi trường quan sát được. Trong khi kiểm tra, tiêu bản được sưởi ấm 37-390C.

Việc đánh giá hoạt lực tiến thẳng được cho điểm theo thang 1 điểm: Điểm 1,0 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 % tinh trùng tiến thẳng 100 - 95 95 - 85 85 - 75 75 - 65 65 – 55 55 - 45 45 - 34 35 - 25 25 – 15 15 - 5

- Nồng độ tinh trùng (C: triệu/ml)

+ Theo phương pháp của Milovanov (1962), Chemineau (1991), Dùng buồng đếm hồng cầu theo kiểu Toma và ống pha loãng hồng cầu pha loãng tinh dịch bằng dung dịch NaCl 3%.

+ Dùng pipet 1000 µl hút 990 µl NaCl 3% vào ống ibendoft Dùng pipet 100 µl hút 10 µl tinh dịch vào ống ibendoft, trộn đều Tỷ lệ pha loãng 100 lần

Hút 1 giọt nhỏ lên buồng đếm hồng cầu

Đặt buồng đếm lên kính hiển vi độ phóng đại 200-600 lần. Đếm tinh trùng trong 5 ô lớn (4 ô ở 4 góc và 1 ô ở giữa – mỗi ô lớn có 16 ô nhỏ, mỗi ô nhỏ có diện tích 1/400 mm2, độ sâu 1/10 mm2).

Nguyên tắc đếm:

Đếm tinh trùng theo đầu, đếm lần lượt theo hàng, hết hàng nọ đến hàng kia theo hình chữ chi, Những tinh trùng nằm trên cạnh ô nhỏ chỉ đếm ở 2 cạnh (thường là cạnh trên và cạnh phải).

Đếm xong lấy kết quả trung bình qua 3 lần đếm được trong 5 ô lớn, Nếu kết quả của 2 lần đếm chênh lệch nhau trên 30% thì phải làm lại. Nếu tinh trùng tụ thành đám không đếm được thì cũng bỏ đi, làm lại.

Công thức tính nồng độ tinh trùng : C = n.106 Trong đó: C: nồng độ tinh trùng trong tinh dịch

n: số tinh trùng đếm được trong 5 ô lớn

- Tỷ lệ tinh trùng sống (Sg: %)

Theo phương pháp của Chemineau vcs (1991): Nhuộm tinh trùng bằng thuốc nhuộm eosin-nigrosin.

Cách tiến hành:

Dùng phiến kính sạch, ấm (35-370C. Nhỏ 1 giọt dung dịch thuốc nhuộm lên 1 đầu của phiến kính, Thêm 1 giọt tinh dịch và trộn đều với dung dịch thuốc nhuộm. Dùng lamen sạch nhẵn đặt lên hỗn hợp chếch 1 góc 450 so với phiến kính, lướt nhẹ sao cho hỗn hợp được dàn mỏng đều.

Đặt tiêu bản lên kính hiển vi độ phóng đại 400 lần. Đếm tổng số khoảng 200 tinh trùng phân bố đều ở các vùng, Các tinh trùng sống không bắt màu. Tinh trùng chết bắt màu đỏ.

Công thức tính:

Sg (%) = Số tinh trùng sống x 100 Tổng số tinh trùng đếm

- Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (K: %)

Theo phương pháp của William (1921), kết hợp với phương pháp của Chemineau (1991), sử dụng phương pháp nhuộm bằng dung dịch xanh Methylen, đỏ Fucsin, Eosin-Nigrosin…

Cách tiến hành:

Nhỏ 1 giọt tinh dịch lên phiến kính sạch, nhẵn, ấm, dùng lamen sạch, nhẵn dàn đều tinh dịch trên phiến kính (nếu đặc pha bằng nước sinh lý hoặc Natricitrai 2,9%). Để tự khô trong không khí, sau đó cố định bằng cồn (2-3 phút), rửa nhẹ bằng nước cất, vẩy khô.

Nhuộm màu tinh trùng: Nhuộm đơn bằng dung dịch eosin-nigrosin trong 5-7 phút, rửa nhẹ bằng nước cất, vẩy khô.

Đặt tiêu bản lên kính hiển vi độ phóng đại 400-600 lần. Đếm tổng số 300-500 tinh trùng bất kỳ, cả tinh trùng bình thường lẫn tinh trùng kỳ hình, không đếm lặp.

100 (%) x (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

N n

K =

Trong đó: K%: là tỷ lệ tinh trùng kỳ hình n: là số tinh trùng kỳ hình

N: là tổng số tinh trùng đếm được (N= 300-500),

Đếm tổng số 300-500 tinh trùng và phân loại kỳ hình theo bảng sau: Số lượng tinh trùng kỳ hình Tổng số tinh

trùng đếm được

Tỷ lệ kỳ hình (%)

Đầu Cổ Thân Đuôi Cộng ... ...