- Chuẩn bị dịch đồng nhất mẫu hoặc pha lõang mẫu để được dịch mẫu cĩ độ pha lỗng 10-1, tiếp tục pha lỗng ở những nồng độ kế tiếp (10-2 - 10-3 ,...) sao cho dãy ống nghiệm ở nồng độ pha lỗng cuối cùng cĩ 01 ống cho kết quả âm tính.
- Thực hiện trên 9 ống nghiệm (mỗi một nồng độ sử dụng 3 ống nghiệm). - Ở mỗi nồng độ sử dụng 01 pippet vơ trùng, tuần tự cấy 10ml dịch mẫu đã pha l lỗng ở nồng độ 10-1 vào 3 ống nghiệm chứa mơi trường Lauryl sulfate tryptose broth cĩ nồng độ kép. Tiếp tục hút 1ml dịch mẫu pha lỗng ở nồng độ 10-2 vào 3 ống nghiệm chứa mơi trường Lauryl sulfate tryptose broth cĩ nồng độ đơn và thực hiện tương tự đối với dịch mẫu pha lỗng ở nồng độ 10-3.
- Nếu nghi ngờ số lượng E.Coli trong mẫu quá cao, phải sử dụng các mẫu cĩ bậc pha lỗng cao hơn.
- Ủ các ống nghiệm ở 370C ± 20C trong 24h ± 2h. Sau 24h nếu khơng cĩ hiện tượng sinh khí ủ tiếp đến 48h ± 2h.
- Ghi nhận số ống sinh khí. Dùng que cấy vịng, cấy chuyền các ống sinh khí sang các ống nghiệm chứa mơi trường EC broth, ủ ở 440C± 20C trong 24h ± 2h, sau 24h nếu khơng cĩ hiện tượng sinh khí, tiếp tục ủ đến 48h ± 2h.
- Ghi nhận số ống sinh khí ứng với mỗi độ pha lỗng.
- Dùng que cấy vịng chuyển dịch mẫu từ các ống EC broth (+) sang ống nghiệm chứa 5 – 10ml tryptone water. Ủ 440C± 20C trong 48h ± 2h. Sau thời gian ủ, nhỏ 0.5ml thuốc thử Kovacs vào các ống nghiệm, lắc đều, sau 1 phút nếu trong ống nghiệm xuất hiện vịng màu đỏ là dương tính.
Cơng Ty Cổ Phần Sữa Việt Nam – Nhà Máy Nước Giải Khát
- Ghi nhận số lượng các ống cho kết quả dương tính trên mơi trường tryptone ứng với mỗi độ pha lỗng.
3.4.4.6 Tính kết quả
- Từ số lượng các ống nghiệm cĩ E.Coli (+) ở mỗi độ pha lỗng của mẫu, dùng bảng MPN thích hợp (bảng 9 ống – phụ lục 1) để tính ra mật độ vi sinh vật trong mẫu và biểu diễn dưới dạng trị số MPN / g mẫu hay MPN/ml mẫu ban đầu chưa pha lỗng.
- Ghi chú: Nếu giá trị MPN < 0,3 E.Coli / g hay ml mẫu thì kết quả ghi như sau: khơng cĩ sự hiện diện E.coli trong 01 ml hay 1g mẫu.
Cơng Ty Cổ Phần Sữa Việt Nam – Nhà Máy Nước Giải Khát