CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.4. Xác định độ lặp lại và độ thu hồi mẫu khi phân tích bằng HPLC:
Từ các số liệu thu được khi xây dựng đường chuẩn Carbaryl, ta nhận thấy độ lặp lại của thời gian lưu Carbaryl rất tốt. Thời gian lưu của tất cả các mẫu đo không phụ thuộc vào nồng độ Carbaryl trong mẫu chuẩn, là (6,291 ± 0,084). Độ lặp lại của diện tích peak đo được cũng nằm trong vùng sai số thực nghiệm chấp nhận được (độ lệch chuẩn tương đối < 5%).
Hình 3.5: Sắc ký đồ của mẫu dung dịch chuẩn Carbaryl 10ppm
Độâ thu hồi mẫu với của qui trình phân tích phụ thuộc vào nồng độ Carbaryl trong mẫu chuẩn:
Bảng 3.3: Độ thu hồi qua cột HPLC của Carbaryl
Nồng độ mẫu,
Diện tích peak TB
Mẫu qua cột Mẫu không qua cột
1 195813,5 ± 9183,6 236675 ± 3668 82,74 ± 4,08
2 313848,8 ± 4519,4 372470,8 ± 4730,4 84,26 ± 1,62
5 750989,5 ± 29288,6 788714,8 ± 11199,7 95,22 ± 3,95
10 1512305 ± 11191 1543244 ± 11111 98,00 ± 1,01
Diện tích peak của các mẫu qua cột và không qua cột đều có độ lệch chuẩn tương đối < 5%. Từ bảng kết quả trên, ta nhận thấy độ thu hồi mẫu giảm theo nồng độ mẫu. Điều này có thể giải thích được là do cột HPLC chỉ giữ lại một lượng Carbaryl nhất định ở các nồng độ khác nhau, do đó chỉ một lượng nhỏ bị giữ lại trên cột cũng ảnh hưởng mạnh đến kết quả đo của các mẫu nồng độ thấp. Kết quả độ thu hồi qua cột của Carbaryl là khá cao (ở nồng độ 10ppm đạt 98%), chứng tỏ Carbaryl có thể rửa giải hết ra khỏi cột phân tích khi sử dụng hệ pha động acetonitrile/nước tỉ lệ 55/45. Ngoài ra ở đây bên cạnh sai số thực nghiệm thì chuẩn Carbaryl sử dụng không phải hoàn toàn tinh khiết (>98%), chính điều này cũng ảnh hưởng đến kết quả độ thu hồi mẫu.
Với chế độ chạy sắc ký và bước sóng hoạt động của đầu dò UV như đã lựa chọn, sắc ký đồ của các mẫu dung dịch chuẩn Dimethoate trong nước có dạng như trên Hình 3.6. Sắc ký đồ của các mẫu này cho một peak duy nhất, tương đối hẹp, thời gian lưu ổn định ở giá trị (3,973 ± 0,064), ngắn hơn rất nhiều so với thời gian lưu của Carbaryl. Hình dạng peak và thời gian lưu cho thấy có khả năng tách được Dimethoate khỏi Carbaryl với chế độ chạy sắc ký đã lựa chọn (cột sắc ký, thành phần pha động, tốc độ dòng, thể tích mẫu bơm vào hệ thống). Nhưng do 2 chất có bước sóng hấp thu cực đại khác nhau, chúng có thể tương tác với nhau nên không thể rút ngắn thời gian phân tích bằng cách pha chuẩn gồm cả Carbaryl và Dimethoate. Thời gian lưu ngắn cũng góp phần rút ngắn thời gian phân tích mẫu, giảm chi phí dung môi và hư hao thiết bị. Từ số liệu đường chuẩn, ta thấy độ lặp lại của diện tích peak và thời gian lưu rất tốt, độ lệch chuẩn tương đối dao động dưới 5%.
Hình 3.6: Sắc ký đồ mẫu dung dịch chuẩn Dimethoate 10ppm
Do hạn chế của phần mềm ứng dụng ghi và xử lý số liệu nên không thể tính được giá trị lý thuyết của ngưỡng phát hiện và ngưỡng định lượng. Giới hạn định lượng của qui trình phân tích Dimethoate được xác định qua thực nghiệm bằng cách đo các mẫu chuẩn có nồng độ thấp. Thực nghiệm cho thấy kết quả đo ổn định và có độ lặp lại tốt (cả diện tích peak lẫn thời gian lưu) ở nồng độ 0,1 ppm.
Tương tự như trường hợp Carbaryl, trong vùng nồng độ khảo sát, độ thu hồi Dimethoate sau cột có xu hướng tăng khi nồng độ Dimethoate trong mẫu nước tăng. Nhìn chung thì kết quả độ thu hồi mẫu cũng khá cao, chứng tỏ hệ pha động acetonitrile/nước với thành phần 55/45 rửa giải Dimethoate khá tốt.
Bảng 3.4: Độ thu hồi qua cột HPLC của Dimethoate
Nồng độ mẫu,
Diện tích peak TB Độ thu hồi mẫu
qua cột, % Mẫu qua cột Mẫu không qua cột
1 34538,3 ± 856,5 107228,0 ± 4621,0 32,21 ± 1,602 61590,5 ± 2266,5 151350,0 ± 4903,0 40,69 ± 1,99 2 61590,5 ± 2266,5 151350,0 ± 4903,0 40,69 ± 1,99 5 163449,5 ± 3465,1 253129,8 ± 8100,2 64,57 ± 1,97 10 211424,5 ± 8118,7 323055,3 ± 9982,4 65,45 ± 3,22 20 463938,3 ± 7005,5 584562,0 ± 19875,0 79,36 ± 2,95
Độ thu hồi mẫu qua cột của Carbaryl cao hơn rất nhiều so với các mẫu Dimethoate, điều này chứng tỏ hệ pha động acetonitrile/ nước với thành phần 55/45 rửa giải Carbaryl ra khỏi cột tốt hơn nhiều so với rửa giải Dimethoate. Tuy nhiên để thuận tiện trong quá trình thí nghiệm, tạo sự ổn định cho cột phân tích, giảm thời gian rửa cột khi thay pha động, trong luận văn này chỉ dùng một hệ pha động 55/45 để phân tích cả 2 chất.