CHƯƠNG III SẢN PHẨM
3.1.2.6Cách đếm Staphylococcus aureus [3] •Nguyên lý
Phương pháp đếm Staphylococcus aureus dựa vào việc trang rộng 0.25ml mẫu thực phẩm đồng nhất và các mẫu đã pha loãng lên mặt thạch Baird-Parker. Môi trường này có chứa nhiều chất ức chế khác nhau, mà không gây trở ngại cho sự phát triển của S.aureus. Khả năng của
S.aureus khử potassium tellurite và thủy phân lòng đỏ trứng trong môi trường đưa tới vùng trẻo
điển hình chung quanh khuẩn lạc đen đặc trưng cho S.aureus. Để xác nhận S.aureus ta dùng test làm coagulase. Coagulase là chất do S.aureus sinh ra làm đông cục huyết tương người và độn vật.
Có nhiều yếu tố tác động đến sự đáng tin cậy của sự phát hiện và cách đếm S.aureus. Trong số những yếu tố quan trọng đó có trạng thái sinh lý của sinh vật, thế cạnh tranh của S.aureus trong môi trường mẫu và giới hạn môi trường dùng để phân lập. Cần lưu ý rằng sinh lý của S.aureus thay đổi khác nhau.
• Vi khuẩn kiểm chứng
Staphylococcus aureus : dương tính phát triển nhiều Staphylococcus epidermidis: âm tính phát triển bị ức chế Bacillus cereus : âm tính, phát triển bị ức chế
• Cách làm
Chuẩn bị mẫu thực phẩm đồng nhất Pha loãng
Nuôi cấy: hút 0.25ml dung dịch thực phẩm đồng nhất đã pha loãng cho lên đĩa thạch Baird- Parker đã làm khô mặt và trang bằng que thủy tinh uốn cong vô khuẩn. Mỗi đậm độ pha loãng phải cấy hai đĩa.
Ủ ấm: đĩa đã lật ngược được ủ 370C trong 24h và 48h
Đếm khuẩn lạc ( nghi là S.aureus)
- Sau 24h chọn những đĩa có từ 30-300 khuẩn lạc, màu đen và bóng, rìa trắng hẹp và bao quanh bằng một vùng trong lan vào trong môi trường. Những khuẩn lạc này đều nghi là
S.aureus .
- Đếm tất cả các khuẩn lạc xuất hiện ở trên đã phát triển trong thời gian ủ ấm kéo dài 24h nữa.
- Khuẩn lạc của một số chủng của S.aureus có thể bao quanh một vùng đục mờ sau 24h. Một số lớn các chủng có thể biểu hiện sau 48h. Mặt khác S.aureus không có coagulase có thể biểu hiện sự trong ở quanh khuẩn lạc sau 48h. Cho nên test đông huyết tương phải tiến hành đối với những khuẩn lạc khả nghi.
- Tất cả các khuẩn lạc xuất hiện vùng trong sau 24h và sau 48h ủ ấm đều phải test coagulase. • Xác định
Test coagulase
- Chuyển khuẩn lạc khả nghi S.aureus sang ống nghiệm có chứa 5ml canh thang tim óc hãm và ủ ấm 35 – 370C.
- Theo dõi hiện tượng đông sau 6h. Đông rõ (+3) dốc ngược ống mà cục đông không đổi vị trí là (+4) được coi như phản ứng của S.aureus .
• Tính toán khuẩn lạc
Số S.aureus phải tính từ tỷ lệ % của những khuẩn lạc được xác nhận với tổng số khuẩn lạc nghi ngờ rồi nhân số đó với 4 (0.25ml trang lên mặt) với độ pha loãng.