CHƯƠNG III SẢN PHẨM
3.1.2.1cách xác định C.Botulinum [3] •Nguyên lý
• Nguyên lý
Phương pháp này dựa vào sự phát hiện trực khuẩn Gram dương điển hình, gần cuối có bào tử hình trái xoan, mọc trên môi trường thịt băm, làm đục môi trường, sinh hơi và tiêu hóa tí chút thịt. Vì C.Botulinum rất giống Clostridium không gây độc tố thông thường khác nên việc phát hiện miễn dịch độc tố đặc hiệu vẫn là cách làm chủ yếu. Việc phát hiện miễn dịch độc tố trong nước lọc môi trường hoặc trên mẫu thực phẩm dựa vào sự bảo vệ chuột bằng kháng độc tố týp ( type- specific antitoxin ) khi tiêm vào màng bụng chuột nước nổi của canh trường khuẩn hoặc chiết xuất thực phẩm.
• Môi trường và thuốc thử - Môi trường thịt băm
- Dung dịch nước muối vô khuẩn - Kháng độc tố đa và đơn giá
• Cách làm
- Nuôi cấy : khoảng 5g mẫu thực phẩm đã đồng nhất vào ba ống môi trường thịt băm đun sôi và để nguội. Đun nóng một ống tới 600C trong 15 phút, một ống khác lên 800C trong 30 phút trong chậu nước, còn ống thứ ba thì không đun.
- Ủ ấm: ủ ấm cả ba ống ở 300C trong 5 – 15 phút và xem độ vẩn đục, sinh hơi và tiêu hóa mẫu thịt.
- Xét nghiệm
Sau 5 ngày theo dõi về vẩn đục, sinh hơi, tiêu hóa các mẫu thịt và mùi. Phết kính, nhuộm Gram và soi kính, quan sát về hình thái của vi khuẩn và ghi tế bào vi khuẩn Clostridium điển hình có sự xuất hiện nha bào và vị trí của nha bào trong tế bào vi khuẩn
Nếu 5 ngày sau không mọc, ủ ấm lại theo dõi tiếp ngày thứ 10
Phát hiện độc tố botulinus trong thực phẩm:
- Đồng nhất mẫu thực phẩm với lượng nước vô khuẩn tương đương bằng cách dùng máy trộn.
- Ly tâm mẫu đồng nhất ở tốc độ cao 1h trong ly tâm lạnh hoặc tiến hành trong phòng lạnh. - Đun sôi 2ml nước nổi trong 10 phút để phá hủy độc tố nếu có
- Tiêm cho 2 chuột nhắt mỗi con 10 phút để phá hủy độc tố nếu có test kiểm chứng đối với độc tố không chịu nhiệt, chuột sẽ không chết bởi độc tố botulinus, nếu có thì trước khi đun sôi.
- Pha nước nổi không đun theo tỷ lệ 1:2, 1:10 và 1:10 với nước muối vô khuẩn.
- Tiêm nước nổi không pha loãng và pha loãng, cứ mỗi đậm độ tiêm cho 2 chuột nhắt, mỗi con 0.5ml.
- Quan sát chuột trong 72h, triệu chứng có độc tố botulinus thường bắt đầu 24h – xù lông, tiếp theo là khó thở, chân yếu, cuối cùng liệt hoàn toàn và chết.