IX. QUY TRÌNH THÍ NGHIỆM
Giọt mơi trường EBSS* Giọt mơi trường IVF (1,2%BSA)Giọt mơi trường IVF (0,6%BSA)
Giọt mơi trường IVF (0,6%BSA) Giọt mơi trường IVF (0,4%BSA)
− Tube OV1, được bọc giấy bạc nhằm tránh tiếp xúc ánh sáng và giữ ấm. − Vệ sinh bàn mổ bằng cồn.
Mổ chuột và thu nhận ống dẫn trứng
− Kéo giãn đốt sống cổ để giết chuột. − Sát trùng phần bụng chuột bằng cồn 700C. − Mổ ổ bụng chuột cái đã cho phối.
− Dùng đầu nhọn kéo tách lớp mỡ bám quanh ống dẫn trứng.
− Thu nhận ống dẫn trứng từ chỗ thắt ngang giữa ống dẫn trứng và buồng trứng tới một đoạn ngắn tử cung ra khỏi xoang bụng.
− Cho mẫu vào ống OV1 đã chuẩn bị trước.
Hình 18: Thao tác kéo da chuột
Thu nhận phơi từ ống dẫn trứng
− Đổ tube chứa ống dẫn trứng OV1 vào đĩa OV1.
− Dùng kim tiêm tách loại hết mỡ cịn bám trên ống dẫn trứng.
− Chuyển ống dẫn trứng vào đĩa OV2 (đã đổ mơi trường từ tube OV2 vào sau khi thao tác rửa ống dẫn trứng xong).
− Dùng kim tiêm xé ống dẫn trứng (thường phơi 2 tế bào tập trung gần đoạn bĩng của ống dẫn trứng nơi diễn ra sự thụ tinh).
− Thu nhận phơi bằng pipette pasteur đã chuẩn bị trước. − Chuyển phơi vào đĩa rửa.
− Rửa phơi qua các giọt mơi trường EBSS* trong đĩa rửa để loại bỏ những phần dơ và rửa đến khi thu được phơi sạch, khơng cịn các cặn bám. − Chuyển phơi vào giọt mơi trường IVF với các nồng độ BSA tương ứng
khi nuơi tại đĩa rửa, để rửa lần cuối và giúp phơi thích nghi dần với mơi trường mới.
IV.3. Theo dõi sự phát triển của phơi và ghi nhận kết quả
Thời gian Cơng việc Kết quả
D1
Thu nhận phơi Cho vào tủ nuơi CO2
Ghi nhận thời gian nuơi
Phơi 2 tế bào
D2 (24 giờ sau nuơi) Quan sát kết quả và ghi nhận Phơi 4 hoặc 8 tế bào
D3 (48 giờ sau nuơi) Quan sát và ghi nhận kết quả Cấy chuyền qua mơi trường mới
Phơi dâu (các tế bào kết khối khơng nhìn thấy rõ được vách tế bào)
D4 (72 giờ sau nuơi) Quan sát và ghi nhận kết quả. Phơi nang (xuất hiện khoang bào, phơi mở rộng)
Bảng 8: Quy trình nuơi và quan sát kết quả