B. Kết quả nghiên cứu trên các giống cúc
3.6. Sự phục hồi của cây sau khi xử lý Ribazole
Sau khi xử lý ribazole, các cây con sinh trưởng sau thời gian một tháng sẽ được cấy chuyền trở lại trong mơi trường nhân nhanh bình thường. Mục đích giai
đoạn này là nhân nhanh các cây đã được xử lý và giúp cây phục hồi khả năng sinh trưởng. Lúc này, ribazole vẫn cịn tồn dư trong cây, nên cũng cịn ảnh hưởng đến sự
sinh trưởng và phát triển của cây. Sựảnh hưởng này tuỳ theo lượng tồn dư (phụ thuộc vào nồng độ xử lý) và tính nhảy cảm của mỗi giống với ribazole.
59
Giống tia muỗng vàng
Giống này chịu đựng khá tốt với Ribazole, cũng cĩ nghĩa là ít chịu ảnh hưởng của Ribazole, do đĩ, khi cấy chuyền trở lại, khả năng phục hồi của cây trong các nghiệm thức khá tốt. Chúng tơi nhận thấy rằng sự phát triển của cây gần như là đồng
đều nhau.
Bảng phân tích ANOVA cũng cho ta thấy được điều đĩ: sự khác biệt giữa các nghiệm thức là khơng cĩ ý nghĩa (đối với bảng phân tích chiều cao chồi, F tính là 0.0125; F bảng ở mức ý nghĩa 95% là 2.39). Sự khác biệt về sự phát sinh của cụm chồi cũng tương tự, số lượng chồi trung bình trong các nghiệm thức khác biệt nhau một cách khơng cĩ ý nghĩa. (bảng phân tích ANOVA – Phụ lục).
Bảng 3.28. Sự sinh trưởng của các cây giống tia muỗng vàng trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 ngày nuơi cấy
Từ lơ nghiệm thức R0 R1 R2 R3 R4 Số chồi trung bình/cụm 4.41 4.04 3.96 3.74 3.55 Chiều cao trung bình của chồi(cm) 2.25 2.25 2.24 2.45 2.23 Tỷ lệ sống của chồi(%) 100 100 100 100 100
Hình 3.6: Các cây giống tia muỗng vàng 30 ngày sau khi cấy trở lại trong mơi trường nhân nhanh
Giống farm hồng
Do là giống chịu khá trước ảnh hưởng của ribazole, nên khi cấy chuyền trở lại trong mơi trường nhân nhanh, sự cĩ mặt của một lượng nhỏ ribazole tồn dư trong mẫu chỉ tác động rất nhỏđến sự sinh trưởng của cây.
Chúng tơi chú ý theo dõi quan sát sự sinh trưởng của các cây trong quá trình nuơi cấy, và nhận thấy sự sinh trưởng khá đều về sự phát sinh cụm chồi cũng như về
chiều cao của chồi.
Ngồi ra, từ những kết quả phân tích số liệu cho thấy sự khác nhau giữa các nghiệm thức là khơng cĩ ý nghĩa.
60
Bảng 3.29. Sự sinh trưởng của các cây giống farm hồng trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 ngày nuơi cấy
Từ lơ nghiệm thức R0 R1 R2 R3 Số chồi trung bình/cụm 3.22 3.15 3.11 3.07 Chiều cao trung bình của chồi(cm) 2.62 2.57 2.48 2.46 Tỷ lệ sống của chồi(%) 100 100 100 100
Giống pingpong vàng
Các cây trong giống pingpong vàng chịu những tác động khá lớn của ribazole trong quá trình xử lý, nhưng khi cấy chuyền trở lại, các cây đã nhanh chĩng phục hồi sự sinh trưởng và phát triển.
Chúng tơi quan sát thấy trong tuần đầu, các mẫu ở lơ R1 và đặc biệt ở lơ nghiệm thức R2 phát triển tương đối chậm so với các mẫu ở lơ đối chứng. Điều này
được lý giải là do ảnh hưởng của ribazole trong mẫu vẫn cịn tác động ức chế lên mẫu, nên một thời gian, cây mới phục hồi trở lại được.
Bảng 3.30. Sự sinh trưởng của các cây giống pingpong vàng trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 ngày nuơi cấy
Từ lơ nghiệm thức R0 R1 R2 Số chồi trung bình/cụm 3.74 3.74 3.66 Chiều cao trung bình của chồi(cm) 2.17 2.09 2.01 Tỷ lệ sống của chồi(%) 100 100 100
Hình 3.7. Giống pingpong vàng ở nghiệm thức R0 và R2 30 ngày sau khi cấy trong mơi trường nhân nhanh
Giống nút vàng
Vì một số điều kiện, chúng tơi chỉ cấy chuyền lại các cây ở lơ nghiệm thức R2 và lơ đối chứng R0.
Trong quá trình xử lý ribazole, giống nút vàng bị ức chế mạnh về sự phát triển chiều cao của chồi. Chúng tơi tạm cho rằng ribazole ảnh hưởng mạnh đến sự phát triển về chiều cao của chồi. Tuy nhiên, kết quả thu được từ thí nghiệm này đã cho ta thấy sự phục hồi khá tốt về yếu tố chiều cao của chồi.
61
Chúng tơi cũng quan sát thấy các cây ở lơ R2 vẫn cịn bị ức chế trong thời gian
đầu nuơi cấy, nhưng rồi cũng phát triển gần bằng với các cây ở lơ đối chứng.
Bảng 3.31. Sự sinh trưởng của các cây giơng nút vàng trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 này nuơi cấy
Từ lơ nghiệm thức R0 R2 Số chồi trung bình/cụm 2.81 2.67 Chiều cao trung bình của chồi(cm) 2.05 2.03 Tỷ lệ sống của chồi(%) 100 100
Hình 3.8 Giống nút vàng ở nghiệm thức R0 và R2 30 ngày sau khi cấy trong mơi trường nhân nhanh
Giống nút tím
Cũng do một số điều kiện chúng tơi chỉ nuơi cấy được các cây trong hai lơ nghiệm thức R2 và lơ nghiệm thức đối chứng.
Giống nút tím là giống chịu ảnh hưởng nặng nề nhất bởi tác động của ribazole. Chính vì thế, quá trình phục hồi của cây trong mơi trường nhân nhanh là khá chậm. Do đĩ, các cây ở nghiệm thức R2 phát triển chậm hơn khá rõ rệt so với cây ở lơ đối chứng.
Bảng 3.32. Sự sinh trưởng của các cây nút tím trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 ngày nuơi cấy
Từ lơ nghiệm thức R0 R2
Số chồi trung bình/cụm 3.63 3.37
Chiều cao trung bình của chồi(cm) 2.46 2.06
62
Hình 3.9 Giống nút tím ở nghiệm thức R0 và R2 30 ngày sau khi cấy trong mơi trường nhân nhanh
3.2.1 Giống tuapin hồng
Giống này cĩ khả nãng chịu đựng khá tốt với ribazole, do đĩ khi cấy chuyền trở lại khả nãng phục hồi của cây khá tốt.
Ở lơ nghiệm thức R1 va R2 (nồng độ 50 và 75 mg/l) 100% cây sống sĩt. Chúng tơi nhận thấy rằng sự phát triển của cây gần nhý là đồng đều nhau ở hai chỉ tiêu chiều cao trung bình của chồi và số chồi trung bình/cụm.Tuy nhiên ở lơ nghiệm thức R3 cĩ hiện týợng mẫu bị chết và sự phát triển của cây khơng đồng đều.
Bảng 3.33. Sự sinh trưởng của các cây giống tuapin hồng trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 ngày nuơi cấy
Số chồi trung bình/cụm
Chiều cao trung bình của chồi(cm) Tỷ lệ sống của chồi(%) R1 3.5a 4.6a 100 R2 3.4a 4.0a 100 R3 1.8b 2.0b 89 CV% 13.86 13.58 LSD0,05 0.61 0.73
63
Hình 3.10. Các cây giống tuapin hồng sau xử lý ribazole 60 ngày
3.2.2Giống nút nghệ:
Là giống cĩ khả nãng chống chịu tốt, cũng cĩ nghĩa nút nghệ là giống ít chịu
ảnh hưởng của ribazole. Ở các nồng độ, các mẫu đều sống với tỷ lệ 100%. Nhýng sự
phát triển của cây khơng được đồng đều, thể hiện ở bảng số liệu về chỉ tiêu số chồi trung bình/cụm, chiều cao trung bình của chồi.
Bảng 3.34. Sự sinh trưởng của các cây giống nút nghệ trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 ngày nuơi cấy.
Số chồi trung bình/cụm
Chiều cao trung bình của chồi(cm) Tỷ lệ sống của chồi(%) R1 1.9b 6.5a 100 R2 1.9b 7.1a 100 R3 2.4a 3.1b 100 CV% 9.61 7.46 LSD0,05 0.29 0.62
64
3.2.3 Giống tiger đồng
Tỷ lệ sống của các cây trong giống tiger đồng là 100% ở lơ nghiệm thứ R1 và R2. Và chết nhiều ở nghiệm thức R3.
Ở nồng độ ribazole cao các cây giống tiger đồng chịu ảnh hưởng khá lớn. Các cây sinh trưởng và phát triển khơng đồng đều.
Bảng 3.35. Sự sinh trưởng của cây giống tiger đồng trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 ngày nuơi cấy
Số chồi trung bình/cụm
Chiều cao trung bình của chồi(cm) Tỷ lệ sống của chồi(%) R1 1.3b 4.6b 100 R2 1.9a 7.1a 100 R3 0.3c 1.0c 16 CV% 25.34 19.42 LSD0,05 0.45 1.24
Hình 3.12. Các cây giống tiger đồng sau khi xử lý Ribazole 60 ngày
3.2.4Giống pha lê xanh
Giống này khá nhạy cảm với ribazole, các mẫu cấy cĩ tỷ lệ sống sĩt khơng cao
ở các nồng độ. Cây sinh trưởng và phát triển khơng đồng đều.
Chúng tơi quan sát thấy rằng các mẫu cấy ở các lơ nghiệm thức phát triển tương đối chậm. Điều này được lý giải là do ảnh hưởng của ribazole trong mẫu vẫn cịn ức chế lên mẫu, nên một thời gian cây mới phục hồi trở lại được .
65
Bảng 3.36. Sự sinh trýởng của các cây giống pha lê xanh trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 ngày nuơi cấy
Số chồi trung bình/cụm
Chiều cao trung bình của chồi(cm) Tỷ lệ sống của chồi(%) R1 1.2a 5.9a 95 R2 0.9a 3.3b 79 R3 0.8a 3.5b 74 CV% 39.74 32.03 LSD0,05 0.60 2.02
Hình 3.13. Các cây giống pha lê xanh sau khi xử lý ribazole 60 ngày
3.2.5 Giống pha lê cam
Trong quá trình xử lý ribazole, giống pha lê cam bịức chế mạnh về sự phát sinh chồi. Tỷ lệ sống của mãu khơng cao.
Chúng tơi quan sát và nhận thấy rằng cây giống pha lê cam phục hồi trong thời gian khá nhanh.
66
Bảng 3.37. Sự sinh trưởng của cây giống pha lê cam trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 ngày nuơi cấy
Số chồi trung bình/cụm
Chiều cao trung bình của chồi(cm) Tỷ lệ sống của chồi(%) R1 1.1b 4.8a 89 R2 2.1a 3.2b 84 R3 1.3b 4.6ab 95 CV% 23.72 23.64 LSD0,05 0.53 1.50
Hình 3.14. Các cây giống pha lê cam sau khi xử lý ribazole 60 ngày Giống tuapin hồng
Các cây giống Tua pin hồng cĩ số chồi trung bình/cụm thấp và khá đồng đều nhau. Tuy nhiên chiều cao của chồi lại chênh lệnh nhau, cĩ những mẫu phát triển khá cao.
Bảng 3.38. Sự sinh trưởng của cây giống tuapin hồng trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 ngày nuơi cấy tiếp theo
Số chồi trung bình/cụm
Chiều cao trung bình của chồi(cm) Tỷ lệ sống của chồi(%) R1 1.4a 7.6a 100 R2 1.6a 2.6c 100 R3 1.2a 4.6b 100 CV% 22.45 9.72 LSD0,05 0.47 0.72
67
Giống nút nghệ
Là giống chịu đựng tốt ở các nồng độ ribazole. Nên khi cấy chuyền lại vào mơi trường nhân nhanh thì lýợng ribazole tồn dý trong cây ít, khơng cịn đủđểảnh hưởng
đến cây. Các cây sinh trýởng và phát triển khá đồng đều nhau. Và tỷ lệ sống vẫn đạt mức 100%.
Bảng 3.39. Sự sinh trưởng của cây giống nút nghệ trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 ngày nuơi cấy tiếp theo
Số chồi trung bình/cụm
Chiều cao trung bình của chồi(cm) Tỷ lệ sống của chồi(%) R1 1.3a 3.5b 100 R2 1.4a 5.2a 100 R3 1.5a 5.1a 100 CV% 26.84 5.50 LSD0,05 0.56 0.38 Giống tiger đồng
Các mẫu cấy trong các nghiệm thức sinh trýởng và phát triển bình thýờng. Cây khỏe mạnh và đồng đều nhau về các chỉ tiêu số chồi trung bình và chiều cao trung bình.
Bảng 3.40. Sự sinh trưởng của cây giống tiger đồng trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 ngày nuơi cấy tiếp theo
Số chồi trung bình/cụm
Chiều cao trung bình của chồi(cm) Tỷ lệ sống của chồi(%) R1 1.6a 4.2a 100 R2 1.7a 4.3a 100 R3 1.4a 4.2a 100 CV% 18.58 14.20 LSD0,05 0.44 0.90
68
Giống pha lê xanh
Pha lê xanh là giống cũng chịu được ribazole ở nồng độ khá cao. Khả nãng phát sinh chồi cụm khơng mạnh.
Bảng 3.41. Sự sinh trưởng của cây giống pha lê xanh trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 ngày nuơi cấy tiếp theo.
Số chồi trung bình/cụm
Chiều cao trung bình của chồi(cm) Tỷ lệ sống của chồi(%) R1 1.8a 2.8a 100 R2 1.9a 3.1a 100 R3 1.3b 2.8a 100 CV% 13.55 8.25 LSD0,05 0.35 0.36
Giống pha lê cam
Cây giống pha lê cam cĩ độ nhạy cảm khá cao với ribazole. Khi đem cấy chuyền lại thì cây cĩ các chỉ tiêu về số chồi trung bình và chiều cao trung bình của chồi thấp.
Bảng 3.42. Sự sinh trưởng của cây giống pha lê cam trong mơi trường nhân nhanh, sau 30 ngày nuơi cấy tiếp theo
Nghiệm thức Số chồi trung bình/cụm
Chiều cao trung bình của chồi(cm) Tỷ lệ sống của chồi(%) R1 1.3a 4.0a 100 R2 1.3a 4.0a 100 R3 1.4a 4.3a 100 CV% 24.60 7.48 LSD0,05 0.50 0.50
C. Thí nghiệm thử nghiệm Test ELISA một số giống hiện đang sản xuất và một số giống đã qua phục tráng
Sau khi test ELISA các mẫu trên, chúng tơi tính tốn số liệu và so sánh với các chứng (+) và chứng (-), chứng trắng, nước cất đã thu được những kết quả sau
Đợt 1
Kết quả test TMV trên một số giống cúc cĩ triệu chứng bệnh virus. Sau thời gian tính tốn và phân tích chúng tơi cĩ được bảng sau:
Hoa cúc
Bảng 3.43: Kết quả test ELISA ở các giống cúc
STT Tên đối tượng Nguồn test Kết quả
lần 1
1 Cúc nút, lá bệnh Mẫu lá bệnh + 2 Cúc đại đĩa Mẫu lá bệnh + 3 Cúc thọ vàng Mẫu lá bệnh - 4 Cúc vàng Mẫu lá bệnh - 5 Cúc pha lê, mẫu lá thường Mẫu lá bệnh + 6 Cúc vàng chưa ra hoa, lá bệnh Mẫu lá ngẫu nhiên - * Mẫu (+): lá bị bệnh * Mẫu (-): Lá khơng bị bệnh
Từ bảng trên, ta thấy đã cĩ dấu hiệu dương tính với virus ở một số cây cúc (cúc nút và cúc đại đĩa). Mà nguồn cúc kiểm tra lấy từ khu vực NTL, nên khả năng lây nhiễm là rất lớn sang những giống chưa cĩ bị nhiễm bệnh như cúc vàng. Cúc pha lê bắt đầu cĩ giấu hiệu nghi nhiễm.
Hoa lan
Bảng 3.44. Kết quả test ELISA ở các giống lan
Stt Tên đối tượng khảo sát Nguồn test
Kết quả
lần 1
1 Lan tím nghĩa, 383 NTL Lá bệnh - 2 Lan tuyết ngọc xanh 382B, NTL Lá bệnh + 3 Trắng bệch 397/57 NTL Lá bệnh + 4 Trắng Bà Rịa, 397/57 NTL Lá bệnh - 5 Miretta xanh, 387 NTL Lá bệnh - 6 Tím hột, 382 B NTL Lá bệnh + 7 Tím hột 396 Võ Trường Toản Lá bệnh - 8 Lan vầng trăng, 403/57 NTL Lá bệnh -
70 9 Cam lửa, 403/57 NTL Lá bệnh + 10 Tím hột 397/57 NTL Lá bệnh + 11 Trắng bệch 382B NTL Lá bệnh + 12 Trắng bệch, 396 Võ Trường Toản Lá bệnh - 13 Tím hột, 383 NTL Lá bệnh -
Đối với hoa lan, tình hình nhiễm bệnh nhiều, sau hai lần test những giống lan bị nhiễm bệnh và nghi nhiễm chiếm 62%, đây là một tỉ lệ khá cao.
Các giống lan khơng nhiễm bệnh cùng nằm trong khu vực của các giống lan bị
bệnh, nên khả năng bị nhiễm virus là rất cao.
Cần phải cĩ các hình thức test lại các giống lan hiện đang sản xuất tại các cơ
sởđể cĩ các hình thức bảo vệ ban đầu thích hợp.
Đợt 2: Khảo sát một số mẫu cây sau khi đã tách và xử lý mẫu để phục tráng lại giống
Bảng3.45. Kết quả test đợt 2 của 2 giống cúc và lan
Stt Tên đối tượng khảo sát Nguồn test Kết quả lần 1 Hoa cúc 1 Cúc nút Lá - 2 Cúc đại đĩa Lá - 3 Cúc thọ vàng Lá - 4 Cúc pha lê Lá - 5 Tiger đồng Lá - Hoa lan 6 Trắng bệch Lá - 7 Tím hột Lá - 8 Miretta xanh Lá - 9 Lan vầng trăng Lá -
71
10 Cam lửa Lá -
11 Bay Golden Hill (BGH) Lá -
12 Xanh chiểu Lá -
Các mẫu hoa lan và hoa cúc trong PTN sau khi được sử lý tách virus khơng cĩ trường hợp nào test cĩ nhiễm virus rõ ràng. Tuy nhiên kết quả này cũng chưa đánh giá đúng hồn tồn vì cịn nhiều nghuyên nhân khác anh hưởng đế kết quả trên.
Bảng 3.46. Danh sách các giống cúc cắt cành cĩ giá trịđã được phục tráng và bảo tồn STT Tên giống STT Tên giống 1 Nút tím 28 Saphia nghệ 2 Nút vàng 29 Caraven 3 Farm tím 30 Farm trắng 4 Tia muỗng vàng 31 Thọđỏ mới 5 Pingpong vàng 32 Thọ vàng nghệ 6 Thọ xanh 33 Thọ vàng chanh 7 Tia muỗng hồng 34 Thọ vàng nhị xanh 8 Đố trắng 35 Phalê trắng 9 Đố đồng 36 Phalê cam
10 Đĩa hồng 37 Phalê xanh(tua xanh) 11 Farm vàng 38 Vàng ĩng
12 Thọ vàng 39 Tia trắng 13 Thọ tím 40 Tia đồng
14 Pha lê 41 Tia muỗng vàng tươi 15 Tím huế 42 Tia muỗng trắng 16 Pingpong trắng 43 Tia muỗng tím 17 Nút tím 44 Mai xanh 18 Tiger đồng 45 Mai đỏ 19 Đố vàng 46 Mai vàng 20 Lys 47 Ngọc bích hồng