M Ở ĐẦU
a. Diện tích, sản lợng trồng lạc của các nớc trên thế giới
3.2.2.2. Phơng pháp điện di trên gen agarose
Ngoài phơng pháp kiểm tra và xác định hàm lợng ADN trên máy quang phổ kế, ta có thể xác định chất lợng ADN mẫu tách đợc bằng phơng pháp điện di trên gel agarose 0,8%. Để xác định hàm lợng ADN, khi điện di mẫu ADN ta cho thêm một giếng đối chứng là ADN lam đa với nồng độ xác định tr- ớc.
- Hóa chất: + Agarose
+ Dung dịch TAE 1X (Tris bazơ 48,8 g/l : axit axetic 10,2 ml/l : EDTA 0,5M 20 ml/l pH 8,0)
+ Ethidium Bromide (EtBr) 0.5 μg/ml + Đệm tra mẫu (Buffers Dye 10X)
- Chuẩn bị gel: Cân 0,8 g agarose hòa tan trong 100 ml dung dịch TAE 1X. Đun trong lò vi sóng cho agarose tan hoàn toàn. Để nguội đến 500 - 600C, đổ dung dịch vào khuôn gel điện di đã cài sẵn răng lợc. Sau 30 - 60 phút, khi gel agarose đã đông cứng, gỡ khay gel cài vào bể điện di. Đổ đệm TAE 1X ngập bản gel agarose khoảng 2 mm, tháo lợc ra khỏi bản gel.
- Tra mẫu: Trộn mẫu theo tỷ lệ (1 μl ADN/1 μl đệm tra mẫu 10X: 7 μl H2O) và tra vào giếng.
- Điện di: Hiệu điện thế dùng để điện di từ 80 - 100 V. ADN chuyển từ cực âm sang cực dơng. Quan sát sự di chuyển bằng mầu của bromophenol để biết lúc nào ngừng điện di.
- Nhuộm ADN: Nhuộm ADN bằng Ethidium Bromide. Bản gel đợc lấy ra khỏi khay điện di và đa vào dung dịch EtBr 0,5μg/ml trong thời gian khoảng 15 phút trên máy lắc nhẹ.
- Soi ADN: Soi trên máy UV và chụp ảnh bằng máy Gen - Doc.