4.1. KẾT LUẬN
4.1.1. Chúng tôi đã xây dựng được quy trình xử lý nước tiểu và tách chiết được DNA-CMV trong nước tiểu để định lương virus trong mẫu thử giúp các bác sĩ chẩn đoán bệnh CMV nhanh và điều trị kịp thời. Mặt khác, định lượng DNA-CMV trong nước tiểu còn nhiều ưu điểm:
- Thu mẫu đơn giản, đặc biệt hiệu quả đối với em bé mới sinh do việc trích máu rất khó khăn. - Không gây đau và tránh lây nhiễm các bệnh qua đường máu.
4.1.2. Chúng tôi xây dựng được quy trình định lượng CMV bằng Real-Time PCR - Bộ primers – TaqMan probe mẫu chuẩn hoạt động hiệu quả và đặc hiệu.
- Nhiệt độ lai của phản ứng là 57,10C. - Nồng độ MgCl2 là 3,5mM.
- Nồng độ TaqMan probe là 300nM. - Nồng độ primer là 0,4M.
- Hệ số tuyến tính của đường chuẩn là 1,0. - Hệ số biến thiên nội phản ứng : 1,06 – 3,99 - Hệ số biến thiên liên phản ứng : 2,93 – 6,97 - Độ nhạy : 102 bản sao/ phản ứng.
- Kết quả phù hợp với phản ứng Real-Time PCR chạy bằng kit của Roche
- Ứng dụng quy trình trên bệnh phẩm cho kết quả tốt. Từ đây cho thấy quy trình định lượng CMV của chúng tôi có đủ khả năng ứng dụng để định lượng CMV trong các mẫu máu, hoặc nước tiểu.
- Giá thành thấp hơn gấp ba lần so với kit Roche ở trung tâm Y khoa Medic. 4.2. CÁC BƯỚC CƠ BẢN CỦA QUY TRÌNH
Hoặc
4.3. ĐỀ NGHỊ
Qua phần ứng dụng quy trình chúng tôi đề xuất thêm một số hướng nghiên cứu tiếp tục: 4.3.1. Dùng quy trình định lượng vừa xây dựng thống kê mối tương quan giữa lượng virus trong mẫu thử với biểu hiện bệnh CMV trên bệnh nhân mang thai, sự tương quan giữa dị tật bẩm sinh với lượng virus trong máu, hoặc nước tiểu người mẹ mang thai và những bệnh nhân suy giảm miễn dịch như ghép tạng….
4.3.2. Ứng dụng quy trình thống kê mối tương quan giữa lượng kháng thể với lượng virus trong máu hoặc nước tiểu liên quan bệnh CMV, so sánh đối chiếu với các phương pháp chẩn đoán khác.
THIẾT LẬP VÀ CHẠY PHẢN ỨNG REAL-TIME PCR TÁCH CHIẾT DNA
ĐỌC KẾT QUẢ, XÁC ĐỊNH SỐ LƯỢNG COPIES/ml MẪU THỬ