NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.5.5Khảo sát khả năng tái sử dụng enzyme urease cố định trên màng chitosan bằng liên kết cộng hĩa trị.
liên kết cộng hĩa trị.
pH cĩ ảnh hưởng rất lớn đến hoạt tính của enzyme cố định. Vì vậy, trong thí nghiệm này, mục đích chúng tơi là khảo sát ảnh hưởng của pH và tìm ra pH tối ưu cho hoạt động của enzyme cố định. Chúng tơi tiến hành thí nghiệm như sau: Cố định các yếu tố như nồng độ enzyme cố định, nhiệt độ, thời gian phản ứng, nồng độ cơ chất. Thay đổi pH của dung dịch phản ứng trong khoảng từ 5 đến 8 rồi xác định hoạt tính của enzyme cố định và enzyme tự do ứng với mỗi pH khác nhau và suy ra pH tối thích.
2.2.5.5 Khảo sát khả năng tái sử dụng enzyme urease cố định trên màng chitosan bằng liên kết cộng hĩa trị. bằng liên kết cộng hĩa trị.
Thí nghiệm khảo sát khả năng tái sử dụng của enzyme urease cố định được tiến hành như sau:
• Xác định hoạt tính của enzyme urease cố định trên ống thủy tinh. Sau đĩ rửa ống thủy tinh bằng nước cất để loại cơ chất và sản phẩm cịn bám trên điện cực.
• Ngâm ống thủy tinh chứa enzyme cố định trong đệm phosphate 1/15 M pH 7, 10 mM EDTA trong vịng 15 phút.
• Ngâm ống thủy tinh chứa enzyme cố định trong phosphate 1/15 M pH 7, 1 mM EDTA trong vịng 30 – 60 phút.
• Bảo quản ống thủy tinh chứa enzyme cố định trong đệm phosphate ở 4oC.
• Lặp lại việc xác định hoạt tính và rửa ống thủy tinh chứa enzyme cố định cho đến khi hoạt tính enzyme giản hơn 50% so với ban đầu. Suy ra số lần tái sử dụng của enzyme cố định.