Thí nghiệm 8: Khảo sát nhiệt độ bảo quản bộ kit PCR halothan
Sau khi đã xác định đƣợc nồng độ glycerol tối ƣu trong Master Mix 2X, chúng tôi tiến hành pha Master Mix 2X với nồng độ glycerol đã xác định và bảo quản ở 10o
C (nhiệt độ đƣợc xác định bằng nhiệt kế tại nơi bảo quản) trong 1 tháng.
Thực hiện 5 phản ứng PCR với Master Mix 2X sau mỗi tuần bảo quản để đánh giá hiệu quả của bộ kit PCR bảo quản ở 10o
C. Thí nghiệm đƣợc bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên một yếu tố. Chỉ tiêu theo dõi là hiệu quả của phản ứng PCR với DNA tách chiết từ cơ heo.
Thí nghiệm 9: Khảo sát độ nhạy của bộ kit PCR halothan
Dùng bộ kit PCR (đã tối ƣu hóa) để thực hiện phản ứng với các nồng độ DNA mẫu 50 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng cho mỗi phản ứng. Thí nghiệm đƣợc bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên một yếu tố. Ở mỗi nồng độ DNA mẫu thực hiện 5 phản ứng PCR. Chỉ tiêu theo dõi là hiệu quả của phản ứng PCR.
Thí nghiệm 10: Khảo sát hiệu quả bộ kit PCR halothan với DNA tách chiết từ mô máu và da
Một trong những mục tiêu hàng đầu của bộ kit PCR halothan là phục vụ cho công tác chọn giống trong ngành chăn nuôi. Do vậy chúng ta không thể giết thú để lấy mẫu cơ trong việc phát hiện gen halothan. Từ yêu cầu thực tiễn đó, chúng tôi tiến hành khảo sát hiệu quả của bộ kit PCR halothan với DNA tách chiết từ máu và da. Việc tách chiết DNA đƣợc thực hiện với bộ kit tách chiết DNA sau 3 tháng bảo quản ở 4o
C. Sử dụng bộ kit PCR halothan bảo quản 1 tuần ở 4oC để thực hiện phản ứng với 10 mẫu DNA tách chiết từ máu và 5 mẫu DNA tách chiết từ da. Kết quả này đƣợc so sánh với kết quả dùng bộ kit PCR halothan để khuếch đại DNA từ cơ. Thí nghiệm đƣợc bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên một yếu tố. Chỉ tiêu theo dõi là hiệu quả của phản ứng PCR.