Thực hiện kỹ thuật PCR xác định gen giới tính và gen thụ thể estrogen trên mẫu DNA đã tách chiết theo bộ kit nhằm đánh giá chất lƣợng DNA tách chiết từ bộ kit. Thí nghiệm đƣợc bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên một yếu tố, tiến hành PCR xác định gen giới tính trên 10 mẫu DNA tách chiết từ cơ bò và kỹ thuật PCR xác định gen thụ thể estrogen trên 5 mẫu DNA tách chiết từ cơ heo.
Kỹ thuật PCR xác định gen giới tính trên bò (Nguyễn Văn Út, 2005)
Áp dụng kỹ thuật multiplex PCR với 2 cặp primer là RIV, UIV và BTANRP1 (BTA1), BTANRP2 (BTA2) (trang 17).
Tên hoá chất Nồng độ cuối PCR buffer 1X MgCl2 1,5 mM RIV / UIV 0,5 µM BTA1 / BTA2 0,4 µM dNTP 200 µM / mỗi loại Taq 1,5 UI DNA 5 ng/µl H2O cất vừa đủ 30 µl
Kỹ thuật PCR xác định gen thụ thể estrogen trên heo (Lê Thị Thu Phƣơng, 2004)
Theo Rothschild và ctv (1994), gen thụ thể estrogen ảnh hƣởng quan trọng đến sự thụ thai. Gen thụ thể estrogen có 2 alen (A và B) nằm trên nhiễm sắc thể số 1, hình thành 3 kiểu gen AA, AB, BB. Trong đó kiểu gen BB làm tăng số con đẻ ra còn sống trên ổ.
Dùng kỹ thuật PCR để khuếch đại đoạn DNA chuyên biệt dài 120 bp nằm trên gen thụ thể estrogen.
Bảng 3.8 Thành phần hoá chất PCR Bảng 3.9 Qui trình phản ứng PCR
Giai đoạn Chu trình nhiệt Tiền biến tính 94oC 5 phút Lặp lại 35 chu kỳ - Biến tính - Ủ bắt cặp - Kéo dài 94oC 55oC 72oC 1 phút 1 phút 1 phút Kéo dài cuối cùng 72o
C 7 phút Trữ 4oC
Tên hoá chất Nồng độ cuối PCR buffer 1 X
MgCl2 1,5 mM Primer xuôi 0,2 µM