bằng cách sử dụng promoter mạnh :
T.reesei VTT-D-79125 là chủng đột biến sản xuất lượng lớn cellulase gồm EGI/II, CBHI/II. ALKO2698 là chủng sản xuất lượng lớn EGI không chứa gen cbh1- được thay thế bởi casset biểu hiện egl1. Vì vậy, hai chủng này được sử dụng như thể nhận plasmid nhằm tạo chủng biến đổi có khả năng sản xuất lượng lớn EGII. Endoglucanase sản xuất
ĐỒ ÁN MÔN HỌC GVHD: ThS.HOÀNG MỸ DUNG
bởi chủng biến đổi EGII liên quan đến số lượng bản sao của casset biểu hiện egl2. Chủng
T.reesei sản xuất lượng lớn EGI/II và không tổng hợp CBHI/II được xây dựng bằng cách thay cbh2 bằng gen egl2.
Các chủng được biến đổi nhờ vào pALK537 và pALK540. pALK537 gồm
promoter cbh1 kich thước 2.2 kb và đoạn AvaII của vùng kết thúc cbh1 có kích thước 0.7 kb. pALK540 chứa promoter cbh1, nhân tố kết thúc và egl2 như trong pALK537.
Hình 2 6: Sơ đồ enzyme cắt giới hạn của plasmid pALK537. egl2 được nối với promoter cbh1. Đoạn NotI 9.2 kb thì được tách ra từ plasmid để thực hiện biến đổi.
Hình 2 7: Giới hạn của plasmid pALK540. Đoạn ClaI-PvuI 11.6 kb thì được tách ra từ plasmid để thực hiện biến đổi.
Biến đổi chủng T.reesei : để gen egl2 biểu hiện cho lượng lớn EG, promoter mạnh của gen cbh1 đượcdùng nhằm điều khiển biểu hiện gen egl2. Tương tự như nghiên cứu trình bày phần trên, các chủng biến đổi được phân tích bằng Southern Blot nhằm xác định số lượng bản sao của egl2.
ĐỒ ÁN MÔN HỌC GVHD: ThS.HOÀNG MỸ DUNG
Hình 2 8: Southern blotting của chủng ALKO3530 và ALKO3574 .
Chủng ALKO3574 chứa 1 bản sao egl1 trong pALK537 tại locus cbh1 trong khi chủng ALKO3530 chứa 2 bản sao egl1 tại cùng vị trí. Hơn nữa, lượng EGI, CBHI/II cũng được phân tích cụ thể.
Bảng 2 3: Sản xuất cellulase bởi chủng chủ VTT-79125 và các chủng đột biến sản xuất lượng lớn EGI.