Hình 3.1: Cà phê Bi Hình 3.2: Cà phê Sẻ mua từ thị trƣờng mua từ thị trƣờng Hình 3.3: Cà phê Mokka mua từ thị trƣờng
3.1. THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 3.1.1. Thời gian 3.1.1. Thời gian
Từ 1 – 3 – 2005 đến 1 – 8 – 2005.
3.1.2. Địa điểm
o Phòng thí nghiệm Bộ môn Công nghệ Sinh học trường Đại học Bách Khoa Thành phố Hồ Chí Minh.
Địa chỉ: 268 Lý Thường Kiệt – Quận 10 – Thành phố Hồ Chí Minh.
3.2. VẬT LIỆU 3.2.1. Cà phê nhân 3.2.1. Cà phê nhân
3.2.1.1. Giống
Chúng tôi tiến hành thử nghiệm trên 3 loại cà phê với tên gọi trên thị trường là: o Cà phê Bi
o Cà phê Sẻ o Cà phê Mokka
3.2.1.2. Nguồn gốc
Nguồn mua từ cửa hàng mua bán cà phê tươi Thuận Hiệp
Địa chỉ: 36A Nguyễn Thị Nhỏ – Phường 14 – Quận 5 – Thành phố Hồ Chí Minh.
3.2.2. Nấm sợi
Các chủng được sử dụng là Aspergillus niger và Trichoderma reesei nhận từ Bộ môn Công nghệ sinh học – thuộc khoa Công nghệ Hóa học và Dầu khí – trường Đại học Bách Khoa Thành phố Hồ Chí Minh. 3.2.3. Cơ chất o Malt o Cám gạo o Bột cà rốt o Trấu o Khoai tây o Bột mì o Bột sắn
3.2.4. Môi trƣờng sử dụng
3.2.4.1. Môi trƣờng nuôi cấy nấm mốc
Sử dụng môi trường thạch malt.
3.2.4.2. Môi trƣờng nhân giống
Sử dụng môi trường cám gạo.
3.2.4.3. Môi trƣờng giữ giống
Sử dụng môi trường PGA.
3.2.5. Hóa chất
3.2.5.1. Hóa chất sử dụng cho môi trƣờng
o (NH4)2SO4 o Glucose o Agar o Nước cất
3.2.5.2. Hóa chất sử dụng cho phƣơng pháp xác định hoạt tính
o Thuốc thử DNS (3,5-dinitrosalicylic acid) C7H4N2O7
DNS
NaOH
Muối potassium sodium tartrate tetrahydrate C4H4O6KNa o Thuốc thử antron 0.2% (gồm antron và H2SO4 đậm đặc) o Dung dịch CMC 1% CMC Dung dịch CH3COOH 1M Dung dịch NaOH 1N o Dung dịch pectin 1% o Dung dịch NH3 10% o Dung dịch ZnSO4 15% o Glucose, lactose o Nước cất
3.2.5.3. Hóa chất sử dụng cho các phƣơng pháp xác định thành phần
o Dung dịch HNO3 đậm đặc o Dung dịch H2SO4 đậm đặc o Dung dịch CH3COOH đậm đặc
o Dung dịch H2O2 30% o Dung dịch H2SO4 0,1N o Dung dịch NaOH 0,1N o Dung dịch NaOH 5% o Dung dịch CH3COOH 1N o Dung dịch HCl 5% o Dung dịch chì acetate 10% o Dung dịch Na2HPO4 bão hòa o Dung dịch CaCl2 2N
o Dung dịch AgNO3 1% o Acid perchloric (HClO4) o Cồn 90o, cồn 80o o Rượu etylic 96% o Ete etylic o Thuốc thử DNS, antron o Phenolphtalein o Glucose o Nước cất 3.2.6. Thiết bị - Dụng cụ Thiết bị
o Máy đo quang phổ SPECTRO 2000RS (LaboMed,inc.) o Máy đo pH
o Máy ly tâm o Máy xay
o Máy cất đạm bán tự động GERHARDT (Đức)
o Dụng cụ đo độ Brix Hand-held Refractometer (ATAGO) o Nồi hấp, tủ sấy, tủ ấm, tủ lạnh
o Tủ hút
o Ống làm lạnh hồi lưu o Cân điện tử, cân phân tích o Nhiệt kế
Dụng cụ o Đĩa petri o Ống nghiệm o Erlen 250ml, 500ml o Becher 100ml, 500ml, 1000ml o Ống đong các loại o Bình định mức các loại o Pipette các loại
o Đèn cồn, que cấy, đũa thủy tinh o Phễu lọc, giấy lọc
o Bếp điện, chảo rang o Rổ nhựa, vải mùng
3.3. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.1. Phƣơng pháp vi sinh vật [22]
3.3.1.1. Phƣơng pháp cấy chuyền và giữ giống (trong điều kiện vô trùng) a. Phƣơng pháp cấy chuyền a. Phƣơng pháp cấy chuyền
Pha chế môi trường nuôi cấy (môi trường thạch malt)
Cho vào 1/3 ống nghiệm
Thanh trùng ở 121oC trong 15 phút Để nghiêng 45o
đến khi thạch đông cứng lại Ống giống
Dùng que cấy vòng đã thanh trùng cấy ria theo đường zic zắc
Cho vào tủ ấm