- Thermonuclease cụa S aureus: cũng như tât cạ các vi sinh vaơt khác S aureus đeău có theơ toơng hợp DNAse ngối bào, như có đieơm khác bieơt so với tât cạ các loài vi sinh vaơt khác,
10. Thử nghieơm tređn mođi trường Kligler Iron Agar hay tređn mođi trường Triple Sugar Iron agar
Nguyeđn taĩc: Thử nghieơn này nhaỉm phát hieơn khạ naíng sử dúng các nguoăn
carbonhydrate có maịt trong mođi trường, khạ naíng sinh H2S và sinh khí trong mođi trường.
Cơ sở sinh hoá: Mođi trường Kligler Iron agar (KIA) và Triple Iron agar (TSI) là các mođi trường raĩn dùng trong thử nghieơm sinh hoá. Mođi trường được phađn phôi vào trong các ông nghieơm, goăm hai phaăn: phaăn đứng sađu khoạng 2,5cm và phaăn nghieđng beđn tređn. Thử nghieơm này nhaỉm hai múc đích: phát hieơn khạ naíng leđn men các nguoăn Carbonhydrate có trong mođi trường và phát hieơn khạ naíng sinh H2S.
Mođi trường KIA chứa hai nguoăn carbohydrate: 1% lactose và 0,1%. glucose, mođi trường TSI tương tự như mođi trường KIA như có theđm 1%. Sucrose. Cơ chê sinh hoá cụa hai mođi trường này tương tự nhau.
Tređn mođi trường KIA, vi sinh vaơt có theơ sử dúng cạ hai nguoăn carbohydrate tređn hay chư sử dúng glucose. Quá trình leđn men này có theơ táo khí trong mođi trường hay khođng tùy thuoơc vào từng loài vi sinh vaơt. Sự sử dúng các nguoăn carbonhydrate khác nhau ở hai đieău kieơn hiêu khí tređn phaăn nghieđng và kỵ khí trong phaăn đứng. Tređn phaăn nghieđng, glucose được trao đoơi theo con đường oxy hoá trong chu trình Krebs đeơ táo sạn phaơm là H2O và CO2 đoăng thời thu được naíng lượng. Lactose là đường đođi, đeơ vi sinh vaơt có theơ sử dúng chúng phại phađn giại thành galactose và glucose, các đường đơn này sẽ đi vào trong tê bào và tham gia vào quá trình chuyeơn hoá noơi bào.
Có ba trường hợp sẽ xãy ra khi nuođi cây vi sinh vaơt tređn mođi trường KIA: chư leđn men glucose, leđn men cạ hai nguoăn carbonhydrate trong mođi trường, khođng leđn men cạ hai nguoăn tređn.
32 Nêu vi sinh vaơt chư leđn men glucose sau 18-24 giờ nuođi cây, tređn phaăn nghieđng cụa mođi trường có pH kieăm và ở phaăn sađu cụa ông có pH acid. Hieơn tượng này được quan sát khi có chât chư thị pH trong mođi trường nuođi cây, thođng thường tređn mođi trường này thường sử dúng chât chư thị pH là phenol red. Tređn phaăn nghieđng, sau 24 giờ nuođi cây, moơt lượng nhỏ glucose trong mođi trường được vi sinh vaơt sự dúng hêt hoàn toàn. Sau đó vi sinh vaơt sử dúng pepton trong mođi trường, quá trình trao đoơi pepton làm giại phóng NH3, sạn phaơm này sẹ làm kieăm phaăn nghieđng cụa ông mođi trường. Ơû phaăn sađu mođi trường có pH acid bởi sự leđn men kỵ khí glucose, các sạn phaơm thu được là những acid hưu cơ, chính các acid này làm cho pH giạm. Nêu trong mođi trường có chât chư thị pH là phenol red thì tređn phaăn nghieđn sẽ có maău đó và phaăn sađu sẹ có màu vàng.
Nêu vi sinh vaơt có theơ sử dúng cạ hai nguoăn carbohydrate: cạ hai phaăn sađu và phaăn nghieđn đeău có tính acid sau 18-24 giờ nuođi cây vì lượng đường lactose đụ đeơ vi sinh vaơt sử dúng trong thời gian này, các sạn phaơm táo thành là các acid hữu cơ. Nêu kéo dài thời gian nuođi cây đên sau 24 giờ, tređn phaăn nghieđn có theơ thu được màu đỏ do mođi trường chuyeơn sang kieăm.
Trong trường hợp cạ hai nguoăn carbon tređn khođng được vi sinh vaơt sử dúng, nguoăn pepton trong mođi trtường trở thành nguoăn cung câp naíng lượng và vaơt lieơu cho quá trình taíng trưởng và phát trieơn cụa vi sinh vaơt. Nhưng thường pepton chư được chuyeơn hoá trong đieău kieơn hiêu khí do đó hieơn tượng làm kieăm mođi trường chư dieên ra tređn phaăn nghieđn và mođi trường chuyeơn thành màu đỏ. Trong khí đó phaăn sau mođi trường sẽ khođng có hieơn tượng chuyeơn maău.
Trong các trường hợp tređn nêu quá trình chuyeơn hoá cụa vi sinh vaơt có theơ táo thành các sạn phaơm khí, chúng sẹ tích tú trong mođi trường và có theơ làm vở thách hay táo thành các bĩt khí beđn trong mođi trường.
Trong thử nghieơm này có theơ phát hieơn khạ naíng sinh H2S từ vieơc chuyeơn hoá các thành phaăn trong mođi trường. Sodium thiosulphate trong mođi trường được sử dúng như nguoăn cung câp lưu huỳnh. Sạn phaơm chuyeơn hoá các hợp chât lưu huỳnh là H2S, đađy là chât khí khođng màu, đeơ nhaơn ra chúng, moơt chât chư thị khác là Fe2+ được cung câp vào dưới dáng ferric ammonium citrate. H2S phạn ứng với Fe2+ sẽ táo thành FeS kêt tụa màu đen trong mođi trường. Như vaơy với thử nghieơm này có theơ nhaơn bieơt được khạ naíng sử dúng các nguoơn carbon khác nhau, khạ naíng táo khí và táo H2S cụa vi sinh vaơt caăn thử nghieơm.
Trong trường hợp sử dúng mođi trường TSI, các hieơn tượng cụng xạy ra tương tự. Tuy nhieđn trong trường hợp cạ hai phaăn nghieđn và phaăn sađu đeău có hieơn tượng acid là có theơ có moơt trong hai hay cạ hai nguoăn lactose và sucrose được vi sinh vaơt sử dúng. Trong trường hợp này caăn phại có các thử nghieơm tređn các nguoăn lactose hay sucrose moơt cách rieđng lẹ.
Phương pháp thử nghieơm
Mođi trường KIA hay TSI được chuaơn bị trong các ông nghieơm với phaăn nghieđng cách naĩp ông nghieơm khoạng 2,5cm và phađn sađu có chieău cao khoạng 2,5cm. Dùng que cây nhĩn đưa vi sinh vaơt vào phaăn sau cụa ông nhưng khođng đúng đáy ông, sau đó cây ria tređn phaăn nghieđng. Uû các ông đã cây ở 37oC trong 18-24 giờ. Ghi nhaơn các bieơu hieơn ở phaăn sau, phaăn nghieđng, sự tích tú khí và táo thành H2S.