- Thermonuclease cụa S aureus: cũng như tât cạ các vi sinh vaơt khác S aureus đeău có theơ toơng hợp DNAse ngối bào, như có đieơm khác bieơt so với tât cạ các loài vi sinh vaơt khác,
1. Phương pháp phát quang sinh hĩc ATP
Phađn tử Adenosine triphosphate (ATP) cĩ maịt trong tât cạ các tê bào sơng, neđn sự phát hieơn ATP là dâu hieơu đeơ nhaơn biêt vaơt chât sơng đang toăn tái. ATP cĩ theơ được phát hieơn và định lượng thođng qua cường đoơ ánh sáng phát ra do sự kêt hợp với enzyme Luciferase. Kĩ thuaơt này cĩ theơ phát hieơn được 1pg ATP, tương ứng với khoạng 1000 tê bào vi khuaơn (10-15g ATP/ tê bào). Quá trình phađn tích chư dieên ra trong vài phút và vì thê phương pháp này được xem là nhanh hơn và thuaơn lợi hơn so với phương pháp đêm khuaơn lác.
Vieơc dùng phương pháp đo hàm lượng ATP đeơ xác định rõ sơ vi sinh vaơt đang hieơn dieơn đã được biêt đên vào naím 1960. Tuy nhieđn, phương pháp này địi hỏi nhieău sự cại tiên trong vieơc thiêt kê thiêt bị đo cường đoơ ánh sáng phát ra và những hĩa chât đeơ oơn định sự phát sáng. Ngày nay phương pháp này được ứng dúng trong 3 lĩnh vực: giám sát veơ sinh, kieơm tra những lối chât lỏng như nước rửa làm sách heơ thơng, đánh giá chât lượng vi sinh cụa thực phaơm. Đeơ đánh giá chât lượng vi sinh cụa thực phaơm thì lượng ATP cụa vi sinh vaơt phại được đo và đieău này địi hỏi những quy trình tách chiêt ATP ra khỏi tê bào vi sinh vaơt.
Phạn ứng phát sáng sinh hĩc trại qua hai giai đốn :
E + LH2 + ATP E – LH2 AMP + PPi (1)
E – LH2 AMP +O2 Oxyluciferin + AMP + CO2 + hv (2)
Phạn ứng phát sáng sinh hĩc ở đom đĩm cĩ theơ viêt lái như sau:
E + LH2 + ATP +O2 Oxyluciferin + AMP + CO2 + hv +PPi
E : luciferase LH2 :luciferin
Aùnh sáng phát ra cĩ bước sĩng 562nm, cĩ màu vàng.
Mg2+
http://www.ebook.edu.vn 40
người thực hieơn quét mău tređn moơt vị trí (thường là 10cm2), sau đĩ nhúng hồn tồn que quét mău vào trong dung dịch chứa những tác nhađn làm phĩng thích ATP, troơn với dung dịch luciferase – luciferin và đaịt vào trong moơt cuvette đeơ đĩc trị sơ ánh sáng.
Sơ đoă các bước định lượng nhanh vi sinh vaơt hieơn dieơn tređn beă maịt baỉng phạn ứng phát sáng