+ Giai đoạn 41 (hình 3.8 b và hình 3.9 a):
Ở vị trí chi trước, phần thân phình ra, da trong, nhìn rõ được chi trước ở phía trong, lỗ huyệt biến mất. Miệng ở giai đoạn này vẫn chưa biến đổi nhiều. Đuôi và vây đuôi bắt đầu tiêu giảm. Các đĩa ngón phình to, nhìn thấy rõ ràng. Nòng nọc bắt
dục.
a. GĐ 41 b. GĐ 42
Hình 3.9. Giai đoạn 41 – 42.
+ Giai đoạn 42 (hình 3.9 b):
Chi trước hoàn thiện và xuất hiện ra bên ngoài, miệng trước mũi, gai thịt và răng hàm tiêu biến, vây đuôi tiêu giảm, lưỡi bắt đầu xẻ thùy, bề mặt nhám dần.
+Giai đoạn 43: miệng nằm trước ở vị trí giữa mũi và mắt, lưỡi xẻ thùy mạnh. Vây đuôi tiêu giảm. Nền xanh đậm dần, các chấm đen trên thân rơ.
+ Giai đoạn 44: miệng nằm vị trí phía dưới viền trước mắt, vây đuôi tiêu giảm mạnh.
+ Giai đoạn 45: miệng đã mở rộng, kéo dài tận dưới viền sau của mắt, đuôi cụt chỉ còn lại một phần nhỏ ở phía sau.
+ Giai đoạn 46: Đuôi mất hẳn, hoàn thiện biến thái. Hình thành nếp da ở gót chân và nếp da trên lỗ hậu môn.
Về màu sắc:
Trứng sau khi được đẻ ra có màu trắng đục (phụ lục 5-6). Tới giai đoạn 11 trứng mềm hơn, đồng thời xuất hiện thể vàng màu vàng gạch (phụ lục 4-2). Giai đoạn 15 cơ thể chuyển sang màu vàng nhạt. Giai đoạn 16, màu sắc giống giai đoạn 15, tuy nhiên ống thần kinh phía trên có màu trắng kem. Giai đoạn 17 đến giai đoạn 19, từ đầu đến đuôi có màu trắng kem, phần bụng vẫn màu vàng nhạt, ngoài ra thể bám dính dưới vây đuôi có màu vàng nâu. Bước sang giai đoạn 22 (phụ lục 4-9), từ đầu đến đuôi chuyển sang màu trắng trong suốt, mặt bụng màu trắng bột, thấy rõ
các mạch máu màu đỏ bám phía ngoài. Giai đoạn 23 (phụ lục 4-11) trên đầu, đuôi và một phần của bụng có các chấm nâu đen. Giai đoạn 25 (phụ lục 4-12, 4-13), phần lưng nòng nọc màu đen, đuôi nâu nhạt, phần da bụng còn mỏng, trong suốt.
Nòng nọc từ giai đoạn 26 đến giai đoạn 40 có lưng màu nâu xám, bụng màu trắng. Cơ đuôi màu trắng và nổi rõ các mach máu màu đỏ xếp theo hình xương cá. Nếp vây đuôi màu trắng. Trên cả cơ đuôi và nếp vây đuôi có các chấm nhỏ li ti màu nâu hoặc màu đen (phụ lục 4-14, 3.17-15, 3.17-16.)
Từ giai đoạn mầm chi trước, nòng nọc bắt đầu có những biến đổi rõ nét về màu sắc. Khi mầm chi trước đã nhìn thấy rõ, chính giữa sống lưng bắt đầu xuất hiện vạch màu xanh nõn chuối (phụ lục 4-17). Những ngày tiếp theo màu xanh lan rộng ra xung quanh. Cuối giai đoạn 41 (phụ lục 4-18), màu xanh đã phủ kín hết đầu, lưng và một phần quá gốc vây đuôi khoảng 2.5 - 3 mm. Đặc biệt mặt trên của lưng, đùi và ống chân của chi sau xuất hiện các chấm màu đen. Mặt trên của chi sau có các vạch màu nâu hoặc màu vàng. Giai đoạn này đĩa các ngón chân đã nhìn rõ và có màu vàng gạch. Đến giai đoạn 42, nòng nọc bung chi trước. Màu xanh đậm hơn và chấm đen rõ hơn. Viền ngoài của nếp vây đuôi lúc này có màu đen và tiêu giảm dần. Đĩa các ngón chân chuyển sang màu vàng nghệ. Trên chi trước cũng nhìn thấy các vạch ngang nâu hoặc vàng như chi sau. Giai đoạn 43: Màu xanh đậm hơn, đặc biệt là viền sau của mí mắt. Các chấm đen to và rõ hơn. Viền ngoài nếp vây màu đen đậm và tiếp tục teo dần (phụ lục 4-22). Bước sang giai đoạn 44, 45 màu xanh sẫm màu hơn. Các chấm đen to và rộng ra tạo thành các đốm đen đậm màu. Nếp vây đuôi hoàn toàn tiêu biến. Đuôi ngắn, cụt còn lại một ít và viền sau màu đen đậm (phụ lục 4-23, phụ lục 4-24). Đến giai đoạn 46, màu xanh trên lưng chỉ còn lại một ít ở sau mí mắt, lưng chuyển sang màu vàng nhạt. Các đốm đen vẫn to và rõ hơn. Đuôi cụt hẳn, hoàn thiện biến thái. Xuất hiện nếp da trên lỗ hậu môn màu trắng (phụ lục 4-25).
Trong quá trình xuất hiện chi trước, chúng tôi quan sát thấy có những cá thể chi trái xuất hiện trước (phụ lục 4-19) nhưng cũng có những cá thể chi bên phải xuất hiện trước (phụ lục 4-20). Điều này cũng tương tự như nghiên cứu của Lê Thị Quý
[20].
3.1.4. Sự phát triển của chi trước