5.3.1. Sản phẩm PCR với cặp mồi đặc hiệu cho E. necatrix
Gen đặc hiệu cho loài cầu trùng E. necatrix được phân lập từ ADN tổng số bằng PCR với cặp mồi đặc hiệu ( mồi xuôi: TTCATTTCGCTTAACAATATTTGGCCTCA và mồi ngược: ACAACGCCTCATAACCCCAAGAAATTTTG) ở nhiệt độ bắt mồi 50ºC trong thời gian 30 giây. Phân tích hình ảnh trên gel agarose 1% cho thấy xuất hiện băng đặc hiệu với kích thước khoảng 200 bp (hình 5.3).
Kết quả của chúng tôi phù hợp với một số kết quả đã nghiên cứu trước đó. Chẳng hạn, Carvalho và cộng sự (2011), nhóm tác giả này sử dụng phương pháp PCR để xác định một số loài cầu trùng gây nhiễm ở gà kết quả loài E. necatrix
cho băng ADN có kích thước 200 bp. Trong khi, Kutkat và cộng sự (2009) khi sử dụng kỹ thuật multiplex PCR để xác định 6 loài cầu trùng gây nhiễm ở trên gà. Kết quả với cặp mồi đặc hiệu đối với loài E. necatrix sản phẩm ADN cho kích thước khoảng 200 bp [21], [32]. 32 1 2 3 200 bp 200 bp 100 bp 600 bp 500 bp
Hình 5.3. Sản phẩm PCR với các mồi đặc hiệu cho E.necatrix. M. Thang chuẩn kích
thước ADN (100 – 1500 bp) của hãng BioBase; 1. Sản phẩm PCR điện di kiểm tra trên gel agarose 1%.
5.3.2. Sản phẩm PCR với cặp mồi đặc hiệu cho E. maxima
Hình 5.4. Sản phẩm PCR với các mồi đặc hiệu cho E. maxima. M. Thang chuẩn kích
thước ADN (100 – 1500 bp) của hãng BioBase; 1, 2, 3. Sản phẩm PCR điện di kiểm tra trên gel agarose 1%.
Gen đặc hiệu cho loài cầu trùng E. maxima được phân lập từ ADN tổng
số bằng PCR với cặp mồi đặc hiệu (mồi xuôi:
M 1 2 3 272 bp 272 bp 200 bp 100 bp 600 bp 500 bp M 1 2 3
GGGTAACGCCAACTGCCGGGTATG và mồi ngược: AGCAAACCGTAAAGGCCGAAGTCCTAGA) ở nhiệt độ bắt mồi 52ºC trong thời gian 30 giây. Phân tích hình ảnh trên gel agarose 1% cho thấy xuất hiện một băng đặc hiệu với kích thước khoảng 272 bp và ổn định qua nhiều lần lặp lại thí nghiệm (hình 5.4).
Một số tác giả trước đó khi tiến hành nghiên cứu trên một số loài cầu trùng gà
cũng cho kết quả tương tự chúng tôi như: Carvalho và cộng sự (2011) với cặp mồi đặc hiệu cho loài E. maxima như trên đã cho kết quả trên băng điện di ADN có kích thước khảng 272 bp. Kutkat và cộng sự (2009) khi sử dụng kỹ thuật multiplex PCR để xác định 6 loài cầu trùng gây nhiễm ở trên gà. Kết quả với cặp mồi đặc hiệu đối với loài E. maxima sản phẩm ADN cho kích thước khoảng 272 bp [21], [32].
5.3.3. Sản phẩm PCR với các mồi đặc hiệu cho E. praecox
Gen đặc hiệu cho loài cầu trùng E. praecox được phân lập từ ADN tổng số bằng PCR với cặp mồi đặc hiệu ( mồi xuôi: AGTCAGCCACCACCAAATAGAACCTTGG và mồi ngược: GCCTGCTTACTACAAACTTGCAAGCCCT) ở nhiệt độ bắt mồi 52ºC trong thời gian 30 giây. Phân tích hình ảnh trên gel agarose 1% cho thấy xuất hiện một băng đặc hiệu với kích thước khoảng 354 bp và ổn định qua nhiều lần lặp lại thí nghiệm (hình 5.5). Kết quả của chúng tôi phù hợp với kết quả nghiên cứu của Kutkat và cộng sự (2009) khi sử dụng kỹ thuật multiplex PCR để xác định 6 loài cầu trùng gây nhiễm ở trên gà. Kết quả với cặp mồi đặc hiệu đối với loài E. praecox sản phẩm ADN cho kích thước khoảng 354 bp. Tương tự, Carvalho và cộng sự (2011) với cặp mồi đặc hiệu cho loài E. praecox như trên đã cho kết quả trên băng điện di ADN có kích thước khảng 354 bp [21].
354 bp200 bp 200 bp 100 bp 600 bp 500 bp 400 bp 300 bp
Hình 5.5. Sản phẩm PCR với các mồi đặc hiệu cho E. praecox. M. Thang chuẩn kích thước ADN (100 – 1500 bp) của hãng BioBase; 1, 2, 3. Sản phẩm PCR điện di kiểm tra trên gel agarose 1%.
5.3.4. Sản phẩm PCR với các mồi đặc hiệu cho E. tenella
Gen đặc hiệu cho loài cầu trùng E. tenella được phân lập từ ADN tổng số bằng PCR với cặp mồi đặc hiệu ( mồi xuôi: CCGCCCAAACCAGGTGTCACG và mồi ngược: CCGCCCAAACATGCAAGATGGC) ở nhiệt độ bắt mồi 55ºC trong thời gian 30 giây. Phân tích hình ảnh trên gel agarose 1% cho thấy xuất hiện một băng đặc hiệu với kích thước khoảng 539 bp và ổn định qua nhiều lần lặp lại thí nghiệm (hình 5.6).
Kết quả nghiên cứu của chúng tôi tương tự như kết quả của Carvalho và cộng sự (2011), khi nhóm tác giả này sử dụng phương pháp PCR để xác định một số loài cầu trùng gây nhiễm ở gà kết quả loài E. tenella cho băng ADN có kích thước 539 bp. Trong khi, Kutkat và cộng sự (2009) khi sử dụng kỹ thuật multiplex PCR để xác định 6 loài cầu trùng gây nhiễm ở trên gà. Kết quả với cặp mồi đặc hiệu đối với loài E. tenella sản phẩm ADN cho kích thước khoảng 539 bp [21], [32. 539 bp M 1 2 3 200 bp 100 bp 600 bp 500 bp
Hình 5.6. Sản phẩm PCR với các mồi đặc hiệu cho E. tenella. M. Thang chuẩn kích
thước ADN (100 – 1500 bp) của hãng BioBase; 1, 2, 3. Sản phẩm PCR điện di kiểm tra trên gel agarose 1%.
5.3.5. Sản phẩm PCR với các mồi đặc hiệu cho E. mitis
Gen đặc hiệu cho loài cầu trùng E. mitis được phân lập từ ADN tổng số bằng PCR với cặp mồi đặc hiệu ( mồi xuôi: AGTCAGCCACCAGTAGAGCCAATATTT và mồi ngược: AGTCAGCCACAAACAAATTCAAACTCTAC) ở nhiệt độ bắt mồi 55ºC trong thời gian 30 giây. Phân tích hình ảnh trên gel agarose 1% cho thấy xuất hiện một băng đặc hiệu với kích thước khoảng 460 bp và ổn định qua nhiều lần lặp lại thí nghiệm (hình 5.7).
Kết quả của chúng tôi phù hợp với kết quả nghiên cứu của Kutkat và cộng sự (2009) khi sử dụng kỹ thuật multiplex PCR để xác định 6 loài cầu trùng gây nhiễm ở trên gà. Kết quả với cặp mồi đặc hiệu đối với loài E. mitis sản phẩm
ADN cho kích thước khoảng 460 bp. Tương tự, Carvalho và cộng sự (2011) với cặp mồi đặc hiệu cho loài E. mitis như trên đã cho kết quả trên băng điện di ADN có kích thước khảng 460 bp [32], [21].
Hình 5.7. Sản phẩm PCR với các mồi đặc hiệu cho E. mitis. M. Thang chuẩn kích
thước ADN (100 – 1500 bp) của hãng BioBase; 1, 2, 3. Sản phẩm PCR điện di kiểm tra trên gel agarose 1%.
460 bp M 1 2 3 200 bp 100 bp 600 bp 500 bp
5.3.6. Sản phẩm PCR với các mồi đặc hiệu cho E. acervulina
Gen đặc hiệu cho loài cầu trùng E. acervulina được phân lập từ ADN tổng số bằng PCR với cặp mồi đặc hiệu ( mồi xuôi: AGTCAGCCACACAATAATGGCAAACATG và mồi ngược: AGTCAGCCACAGCGAAAGACGTATGTG) ở nhiệt độ bắt mồi 50ºC trong thời gian 90 giây. Phân tích hình ảnh trên gel agarose 1% cho thấy xuất hiện một băng đặc hiệu với kích thước khoảng 811 bp và ổn định qua nhiều lần lặp lại thí nghiệm (hình 5.8).
Kết quả của chúng tôi phù hợp với kết quả nghiên cứu của Kutkat và cộng sự (2009) khi sử dụng kỹ thuật multiplex PCR để xác định 6 loài cầu trùng gây nhiễm ở trên gà. Kết quả với cặp mồi đặc hiệu đối với loài E. acervulina sản phẩm ADN cho kích thước khoảng 811 bp. Tương tự, Carvalho và cộng sự (2011) với cặp mồi đặc hiệu cho loài E. acervulina như trên đã cho kết quả trên băng điện di ADN có kích thước khảng 811 bp [32], [21].
Hình 5.8. Sản phẩm PCR với các mồi đặc hiệu cho E. acervulina. M. Thang chuẩn
kích thước ADN (100 – 1500 bp) của hãng BioBase; 1, 2, 3. Sản phẩm PCR điện di kiểm tra trên gel agarose 1%.