Chương 2: ĐỐI TƯỢNG & PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu
3.2.5.3. Nhận dạng chất M
Nhận dạng bằng phổ 1H-NMR và 13C-NMR
Bảng 3.7: Phổ 1H, 13C-NMR của M và mangiferin. Vị trí
carbon
Phổ NMR của M
(DMSO-d6) Phổ NMR của mangiferin (MeOD)
δc (ppm) δH (ppm) δc (ppm) δH (ppm) 1 161.7 13.74 (1-OH) 161.7 13.80 (1-OH) 2 107.6 -- 107.5 -- 3 163.8 -- 163.8 -- 4 93.3 6.37, s 93.3 6.40, s 4a 156.2 -- 156.2 -- 4b 101.3 -- 101.2 -- 5 102.6 6.86, s 102.4 6.88, s 6 150.8 -- 150.9 -- 7 143.7 -- 143.9 -- 8 108.0 7.38, s 107.8 7.41, s 8a 111.7 -- 111.4 -- 8b 154.0 -- 154.6 -- CO 179.1 -- 179.0 -- 1’ 73.1 4.59, d, 9.5 Hz 73.1 4.60, d, 8.3 Hz 2’ 70.2 4.04, t, 8.5 Hz 70.3 4.03, t, 9.5 Hz 3’ 78.9 3.16, m 79.0 3.16, m 4’ 70.6 3.16, m 70.6 3.16, m 5’ 81.5 3.16, m 81.5 3.16, m 6’ 61.4 3.68, d, 11.5 Hz3.40, m 61.4 3.40, dd, 11; 2.1 Hz; 3.60, dd, 11; 4.6 Hz
Dựa vào căn cứ dữ liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H, 13C-NMR, so sánh với các dữ liệu phổ đã công bố cho phép kết luận chất thu được là mangiferin. 3.3. Bàn luận
Về đặc điểm thực vật
Nghiên cứu của chúng tôi đã mô tả đặc điểm hình thái và xác định tên khoa học cho cây xoài tròn Yên Châu, Sơn La là loài Mangifera indica, góp phần làm
[8].
Về các kết quả nghiên cứu về đặc điểm vi học: Vi phẫu lá và cuống lá xoài tròn có rất nhiều tế bào cứng và sợi nằm xen kẽ trong lớp mô dày đều, bó libe gần thành hình tròn hoặc bầu dục, rỗng ở giữa, bao quanh libe là một vành tế bào cứng, tinh thể calci oxalat nằm rải rác trong mô mềm và mô dày. Bột lá xoài tròn có rất nhiều tinh thể calci oxalat hình khối kích thước không đều nằm rải rác hoặc thành đám, các tế bào cứng thành dày khoang hẹp. Những đặc điểm đặc trưng này là cơ sở cho việc xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu sau này.
Về thành phần hóa học
Các kết quả về định tính hóa học cho thấy trong lá xoài tròn Yên Châu, Sơn La có flavonoid, tanin, sterol, triterpen, carotenoid, đường khử. Không có coumarin, saponin, anthranoid, alkaloid, chất béo, polysarchrid, acid amin, acid hưu cơ. Tuy nhiên, trên thế giới người ta đã phân lập được các hợp chất saponin (Indicosid A và B), coumarin (mangcoumarin), chất béo, acid amin từ các bộ phân khác trên cây xoài (M. indica).
Về sắc kí lớp mỏng chúng tôi đã khảo sát và tìm ra hệ dung môi: EtOAc- HCOOH-H2O [10:1,5:1] có khả năng tách tốt các thành phần trong dịch chiết methanol toàn phần của lá xoài. Kết quả định tính bằng sắc kí lớp mỏng cũng một lần nữa khẳng định sự có mặt của mangiferin trong lá xoài tròn (Mangifera indica
L.). Điều này hoàn toàn phù hợp với các nghiên cứu trước đây về loài M. indica. Bên cạnh đó, chúng tôi cũng đã tiến hành khảo sát khả năng chiết xuất mangiferin bằng dung môi ethanol ở các nồng độ khác nhau, kết quả cho thấy ethanol 70o là dung môi chiết xuất tốt nhất. Đây là một đóng góp mới, tạo cơ sở ban đầu cho việc nghiên cứu xây dựng qui trình chiết xuất trên qui mô công nghiệp.
Sau một thời gian nghiên cứu chúng tôi đã chiết xuất và tinh chế được mangiferin tinh khiết từ lá xoài tròn. Qui trình chiết xuất sử dụng dung môi ethanol
chiết xuất trên qui mô công nghiệp. Hiệu suất của toàn bộ quá trình chiết xuất và tinh chế đạt 15,99%, thấp hơn so với các nghiên cứu trước đây [9], [33]. Mangiferin là một xanthonnoid có nhiều tác dụng sinh học đang được quan tâm như: chống vi rút đặc biệt là vi rút herpet (hiện tại trên thị trường dược phẩm thế giới cúng như Việt nam đã có rất nhiều sản phẩm phục vụ cho điều trị bệnh do loại vi rút này gây nên), chống đái tháo đường, chống viêm, điều hòa miễn dịch, kháng khuẩn chống oxy hóa… Dữ liệu phổ 1H-NMR và 13C-NMR thu được đóng góp vào cơ sở dữ liệu phổ để so sánh nhận dạng mangfierin sau này.
Các kết quả định lượng bằng HPLC cho thấy hàm lượng mangiferin trong lá xoài tròn Yên Châu-Sơn La khá cao (6-7%), cao hơn so với loài quéo Sơn La (4- 5%) trong một nghiên cứu của Đỗ Hương Lan [10]. Chúng tôi nhận thấy đây là một dược liệu quí có tiềm năng đưa vào chiết xuất mangiferin trên qui mô công nghiệp. Mặt khác, hàng năm có một số lượng lớn lá xoài tròn bỏ đi từ sản xuất nông nghiệp. Nếu nguồn nguyên liệu lá xoài này được tận dụng để chiết xuất mangiferin sẽ làm tăng thêm giá trị và hình thành chuỗi giá trị liên hoàn cho cây xoài. Phương pháp HPLC là một phương pháp có thời gian phân tích ngắn, độ đúng độ, chính xác và độ nhạy cao hơn nhiều so với phương pháp đo phổ hấp thụ UV-VIS. Các chất được phân tách ra trong quá trình định lượng nên tránh được ảnh hưởng của chất màu cũng như các tạp chất khác trong dịch chiết được liệu. Cùng với sự phát triển của khoa học kĩ thuật, phương pháp này ngày càng được ứng dụng rộng rãi trong các lĩnh vực kiểm nghiệm nói chung và kiểm nghiệm dược liệu nói riêng. Việc sử dụng phương pháp này trong kiểm nghiệm dược liệu sẽ giúp đánh giá tốt hơn chất lượng của dược liệu trước khi đưa vào sử dụng.
Sau thời gian làm thực nghiệm chúng tôi đã thu được những kết quả sau:
Về thực vật
Đã mô tả đặc điểm hình thái và giám định tên khoa học cho cây xoài tròn thu hái tại huyện Yên Châu, Sơn La là loài Mangifera indica L., họ Anacardiaceae.
Về hóa học
Bằng phản ứng hóa học đã xác định được trong lá xoài tròn Yên Châu có các thành phần: flavonoid, tanin, carotenoid, steroid-triterpen, đường khử.
Kết quả định tính bằng sắc kí lớp mỏng có so sánh với mangiferin chuẩn, khai triển hệ dung môi EtOAc-HCOOH-H2O [10:1,5:1] cho thấy trong lá xoài tròn Yên Châu, Sơn La có mangiferin.
Đã khảo sát khả năng chiết xuất mangiferin của hỗn hợp dung môi EtOH- H2O bằng SKLM và HPLC, nhận thấy EtOH 70o là dung môi có khả năng chiết mangiferin tốt nhất.
Bằng phương pháp HPLC, đã khảo sát hàm lượng mangiferin trong lá xoài tròn Yên Châu, Sơn La: lá bánh tẻ có hàm lượng mangiferin cao nhất (7,39%), tiếp đến là lá xoài non (6,78%) và lá xoài già (6,47%).
Đã tiến hành chiết xuất, tinh chế và xác định được cấu trúc của mangiferin từ lá xoài tròn Yên Châu, Sơn La.
4.2. Đề xuất
Do thời gian nghiên cứu có hạn nên đề tài của chúng tôi chỉ nghiên cứu được những bước đầu về loài xoài tròn Yên Châu, Sơn La. Đề nghị tiếp tục nghiên cứu tìm ra qui trình chiết xuất và tinh chế mangiferin có hiệu suất cao trên qui mô công nghiệp