IV- ỨNG DỤNG CỦA PHƢƠNG PHÁP HPLC
b. Chế phẩm đa thành phần
-i- HPLC luôn là lựa chọn hàng đầu
Có thể định lượng đồng thời nhiều hoạt chất.
Không cần tinh khiết hóa mẫu
Thời gian nhanh
Độ chính xác cao
Ít sử dụng dung môi, hóa chất độc hại.
-ii-Ví dụ về định lượng viên nang Multivitamin:
một) Tiêu chuẩn 1 : Định lượng Viên nang Multivitamin bằng các phương pháp hóa lý
Các phương pháp thực hiện:
Vitamin B1 (Thiamin nitrat hoặc Thiamin hydroclorid) :phương pháp cân khối lượng
Vitamin B2 (Riboflavin) : pp đo quang phổ 444nm.
Vitamin B6 (Pyridoxin hydroclorid) : phương pháp đo màu (tạo màu với clorimid 0.04% và đo quang bước sóng 650nm).
Vitamin PP (Nicotinamid) : phương pháp đo màu (tạo màu với cyanogens bromide và đo ở 450nm).
Vitamin C (Acid ascorbic) :phương pháp chuẩn độ iod.
Nhận xét
Mất nhiều thời gian, nhân lực
Qui trình chuẩn bị mẫu nhiều công đoạn : sai số tăng
Sử dụng nhiều hóa chất, thuốc thử : độc hại
Không cần thiết bị hiện đại, đắt tiền
hai) Tiêu chuẩn 2 : Định lượng Viên nang Multivitamin bằng HPLC
Điều kiện sắc ký tối ưu
Cột Phenomenex RP-C18 (15cm;4.6mm;5μm)
Pha động: Dung dịch đệm-MeOH (80:20)
Tốc độ dòng : 1ml/phút
Detector : 280nm
Thể tích tiêm mẫu : 20l
Pha dung dịch mẫu
Dung dịch chuẩn : gồm 5 loại vitamin trong dung dịch đệm
Dung dịch thử : bột thuốc pha trong dung dịch đệm
Tiến hành
Sau khi triển khai hệ thống ổn định, lần lượt tiêm dung dịch chuẩn và thử vào máy.
Tính kết quả:𝐂𝐓 = 𝐒𝐓 𝐒𝐂 ∗ 𝐂𝐂 = 𝐒𝐓 𝐒𝐂 ∗ 𝐃𝐓 𝐃𝐂 ∗ 𝐦𝐏 ∗ 𝐚 ∗ 𝐂% Nhận xét Một lần định lượng 5 hoạt chất
Cách chuẩn bị mẫu đơn giản
Ít sử dụng hóa chất độc hại
Hóa phân tích 2 Trần Trung Trực 31
Pk # Name Retention Time Area Percent Area plates (USP) Theoretical Resolution (USP) Asymmetry
1 Acid Ascorbic 1.813 7270693 26.316 2828 0.00000 1.22450 2 Nicotinamid 3.163 2625117 9.502 4955 8.54023 1.22861 3 Pyridoxin HCl 6.073 5255353 19.022 6219 11.93081 1.15197 4 Riboflavin 12.857 8719194 31.559 5080 13.17691 1.03653 5 Thiamin nitrat 17.340 3757565 13.601 5215 5.33110 0.99054
Pk # Name Retention Time Area Percent Area plates (USP) Theoretical Resolution (USP) Asymmetry
1 Acid Ascorbic 1.817 7460892 26.915 3065 0.00000 1.43662
2 Nicotinamid 3.177 2735318 9.868 4851 8.67075 1.21814
3 Pyridoxin HCl 6.117 5686095 20.513 5996 11.79764 1.14919
4 Riboflavin 13.120 8305266 29.961 4938 13.17953 1.02747
Hóa phân tích 2 Trần Trung Trực 32