Tiêu chuẩn viện dẫn

II. Ý KIẾN KHÁC:

2.4.2.1.Tiêu chuẩn viện dẫn

Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 4806:2007 (ISO 06495 : 1999) về thức ăn chăn nuôi - xác định hàm lượng clorua hoà tan trong nước.

2.4.2.2. Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này qui định phương pháp xác định hàm lượng clorua hòa tan trong trong nước của thức ăn chăn nuôi được tính theo Natri Clorua.

Phương pháp này áp dụng cho thức ăn chăn nuôi.

2.4.2.3. Nguyên tắc

Mẫu thức ăn chăn nuôi sẽ được vô cơ hóa để đảm bảo phân hủy toàn bộ lượng chất hữu cơ gây cản trở quá trình hòa tan muối trong mẫu cũng như sai lệch kết quả thực nghiệm.

Hòa tan phần clorua có mặt trong mẫu thử bằng nước, sau đó acid hóa nhẹ bằng acid citric.

Ion clorua được kết tủa thành bạc clorua bằng dung dịch bạc nitrat thể tích chuẩn. Lượng bạc nitrat dư sẽ được chuẩn độ bằng dung dịch amoni thioxyanat thể tích chuẩn.

32 2.4.2.4. Dụng cụ và hóa chất a. Dụng cụ - Lò nung - Cân phân tích 4 số lẻ - Erlen cổ nhám 250ml - Erlen 250ml

- Giấy lọc Trung Quốc ∅11

- Burette 25 ml - Pipet 5 ml - Bình định mức 100ml b. Hóa chất - Nước cất - Acid Citric - NH4SCN 0.1N

- Dung dịch Amoni Sắt (II) Sunfat bão hòa (Chuẩn bị từ NH4(FeSO4)2.12H2O) - Dung dịch carrez 1: hòa tan trong nước cất 10.6 g Kali hexaxyanoferat (II)

[K3Fe(CN)6]. Định mức bằng nước cất đến 100 ml

- Dung dịch carrez 2: hòa tan trong nước 21.9 g Kẽm acetat ngậm 2 phân tử nước [Zn(CH3COO).2H2O], thêm 3 ml dung dịch acid acetic đậm đặc. Định mức bằng nước cất lên 100 ml

2.4.2.5. Cách tiến hành

a. Vô cơ hóa mẫu

Rửa chén sứ thật sạch sau đó tráng lại nhiều lần bằng nước cất để đảm bảo chén không còn chứa Clo. Sấy chén sứ ở nhiệt độ 1000C trong 1 giờ, để nguội trong bình hút ẩm.

Cân chính xác khoảng 4 g mẫu bỏ vào chén sứ, sau đó nung ở nhiệt độ 5500C trong khoảng 4-5 giờ, để nguội.

b. Phân tích hàm lượng Clorua hòa tan

Chuyển toàn bộ lượng tro vào bình, định mức bằng nước cất sao cho lượng nước cất thêm vào không quá 60ml. Thêm 2ml dung dịch carrez 1; 2ml dung dịch carrez 2, định mức lên 100ml, lắc đều.

Chờ khoảng 30 phút cho dung dịch ổn định thì tiến hành lọc (sử dụng giấy lọc

∅11 gấp hình quạt). Dung dịch lọc trong erlen cổ nhám, dung dịch này dùng để phân tích hàm lượng clorua hòa tan. Dùng pipet hút chính xác 5ml dung dịch tro, cho vào

33

erlen 250ml, thêm 50ml nước cất, 5ml acid citric để tạo môi trường, 2ml NH4(FeSO4)2 bão hòa, 5ml AgNO3 0.1N

Nhỏ thêm 2 giọt NH4SCN 0.1N chứa trên burrete đã chuẩn về vạch 0 ml trước đó, dung dịch sẽ tạm thời xuất hiện kết tủa màu đỏ gạch, lắc nhẹ đến khi kết tủa màu đỏ gạch biến mất hoàn toàn. Nếu kết tủa vẫn không mất đi thì thêm chính xác khoảng 1ml AgNO3 0.1N. Lắc nhẹ lần nữa để kết tủa biến mất, ghi lại tổng thể tích AgNO3 đã sử dụng

Chuẩn độ lượng AgNO3 dư bằng dung dịch NH4SCN 0.1N trên burette trước đó, chuẩn độ chậm và lắc đều tay, nhận biết điểm dừng của phản ứng bằng sự thay đổi màu sắc của dung dịch từ màu trắng đục qua màu đỏ gạch bền trong ít nhất là 30 giây, ghi lại thể tích NH4SCN đã sử dụng.

Làm tương tự như trên với mẫu trắng là nước cất, ghi lại giá trị NH4SCN tiêu tốn. 2.4.3. Tính toán kết quả Wwc=𝑴[(𝑽𝑺𝟏−𝑽𝑺𝟎)×𝑪𝑺−(𝑽𝒕−𝑽𝒕𝟎)×𝑪𝒕] 𝒎 × 𝑽𝒊 𝑽𝒂× 𝒇 × 𝟏𝟎𝟎 Trong đó

Wwc là hàm lượng clorua hòa tan trong nước của mẫu thử, được biểu thị theo natri clorua, tính theo phần trăm khối lượng;

M là khối lượng phân tử gam của dung dịch natri clorua (M = 58,44 g/mol), tính bằng gam trên mol;

Vs1 là thể tích của dung dịch bạc nitrat thêm vào để chuẩn độ dung dịch thử

(8.5), tính bằng mililít; (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

Vs0 là thể tích của dung dịch bạc nitrat thêm vào để chuẩn độ dung dịch mẫu trắng (8.6), tính bằng mililít;

Cs là nồng độ của dung dịch bạc nitrat (4.10), tính bằng mol trên lít;

Vt1 là thể tích của dung dịch amoni thioxynat hoặc dung dịch kali thioxyanat dùng để chuẩn độ dung dịch thử (8.5), tính bằng mililít;

Vt0 là thể tích của dung dịch amoni thioxyanat hoặc dung dịch kali thioxyanat

34

Ct là nồng độ của dung dịch amoni thioxyanat hoặc dung dịch kali thioxyanat (4.9), tính bằng mol trên lít;

m là khối lượng của phần mẫu thử, tính bằng miligam;

Vi là thể tích của dung dịch thửđã được chuẩn bị trong 8.2, 8.3 và 8.4 (Vi = 500 ml), tính bằng mililít;

Vo là thể tích phần mẫu thử của dịch lọc đã lấy (xem 8.5), tính bằng mililít; ¦ là hệ số pha loãng;

2.4.4. Kết quả thực nghiệm

Kết quả thực nghiệm được ghi nhận ngày 08/05/2021, dựa trên mẫu cám chăn nuôi, được ghi lại dưới bảng sau:

Bảng 2.8. Kết quả thực nghiệm hàm lượng muối

Mẫu

Mẫu 1 Mẫu 2 Mẫu 3 Mẫu 4 Mẫu 5

Lần 1 (%) 0.59 0.6 0.63 0.78 0.48

35

2.5. Phân tích hàm lượng canxi có trong thức ăn chăn nuôi 2.5.1. Vai trò và giá trị của canxi

Thiếu Canxi (Ca) trong cơ thể gia cầm sẽ dẫn đến tình trạng còi xương, giảm tính thèm ăn, chậm lớn, lông xù, trứng mỏng vỏ, tình trạng cắn mổ lẫn nhau gia tăng. Thừa Ca (tỷ lệ 5% trong thức ăn) gây độc với những rối loạn trao đổi chất, giảm tính thèm ăn, chậm lớn, có hiện tượng phù nề, tăng bài tiết Na và Mg, rối loạn thần kinh, gà đi đứng khó khăn, loạng choạng (bệnh gout).

2.5.2. Phương pháp phân tích hàm lượng canxi có trong thức ăn chăn nuôi [9]

2.5.2.1. Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này qui định phương pháp chuẩn độ để xác định hàm lượng canxi trong thức ăn chăn nuôi.

Phương pháp này có thể áp dụng cho tất cả các loại thức ăn chăn nuôi có hàm lượng canxi lớn hơn 1 g/kg.

2.5.2.2. Tiêu chuẩn viện dẫn

TCVN 4325:2007 (ISO 6497:2002), Thức ăn chăn nuôi – Lấy mẫu.

TCVN 6952:2001 (ISO 6498:1998), Thức ăn chăn nuôi – Chuẩn bị mẫu thử. ISO 6490/2, Animal feeding stuffs – Determination of calcium content – Part 2: Atomic absorption spectrometric method (Thức ăn chăn nuôi – Xác định hàm lượng canxi – Phần 2: Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử).

2.5.2.3. Nguyên tắc

Phân hủy mẫu thức ăn chăn nuôi ở nhiệt độ cao nhằm phá vỡ hoàn toàn các cấu trúc hữu cơ, chuyển toàn bộ lượng Canxi trong mẫu về dạng canxi vô cơ, sau đó sử dụng HCl để chuyển thành Ca2+

.

Trong môi trường kiềm, ion C2O42- kết tủa chọn lọc với ion Ca2+ (tủa màu trắng). Kết tủa thu được sẽ hòa tan trong H2SO4 tạo ra H2C2O4.

Trong môi trường axit, KMnO4 và H2C2O4 tác dụng với nhau theo phương trình phản ứng: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

36 Chỉ thị: màu hồng của lượng dư KMnO4

Phản ứng xảy ra theo chiều thuận. Điểm tương đương được xác định khi chỉ thị chuyển màu hồng nhạt và bền màu trong khoảng 30 giây.

Vì lúc đầu phản ứng xảy ra chậm nên phải đun nóng dung dịch H2C2O4 đến 70-800C để tăng tốc độ phản ứng, nhưng không được quá 900C, vì cellulose trong giấy sẽ phân hủy gây sai lệch kết quả.

2.5.2.4. Dụng cụ và hóa chất a. Dụng cụ a. Dụng cụ - Becher 250ml - Becher 500ml - Erlen cổ nhám - Bình định mức 100ml - Pipet 10ml

- Phễu thủy tinh

- Giấy lọc Trung Quốc ∅11

- Giấy lọc Whatman ∅15

- Bếp điện CB300 và bếp thủy phân - Burette 25ml

- Ống đong 50ml - Đĩa petri

- Bình tia nước cất

b. Hóa chất

- Dung dịch HCl 1:3 ( tỉ lệ HCl : nước cất theo thể tích) - Dung dịch HCl 1:1 (tỉ lệ HCl: nước cất theo thể tích) - NH3 đậm đặc

- H2SO4 5%

- KMnO4 0.05N (để ổn định 10 ngày kể từ ngày pha) - NH4Cl 5% (50g/l)

- Amoni Oxalat bão hòa lạnh

- Dung dịch Bromocresol 0.4g/l (pha trong cồn 96) - Acid Citric

2.5.2.5. Cách tiến hành

Chuyển mẫu tro ở HD 01 vào becher 250ml bằng nước cất sao cho lượng nước không vượt quá 10 ml (lưu ý làm ướt tro bằng cách nhỏ một ít nước cất vào lượng tro trong chén sứ trước khi chuyên vào). Tráng chén sứ nhiều lần cho sạch tro bằng

37

khoảng 80 ml HCl 1:3, đun sôi nhẹ trong khoảng 10 – 15 phút (đến khi dung dịch đun còn lại 50 ml). Để nguội sau đó chuyển toàn bộ dung dịch tro vào bình định mức 100 ml, định mức bằng nước cất lên 100 ml. Lọc dung dịch sau định mức vào erlen cổ nhám (sử dụng giấy lọc ∅11 gấp hình quạt), dung dịch sau lọc dùng để phân tích canxi và phospho.

Cho cả giấy lọc và phần cặn vào chén sứ, nung ở 550÷200C trong 4 giờ, lấy chén sứ ra cho vào bình hút ẩm để trong 1 giờ, cân trọng lượng và tính % cát sạn trong mẫu.

Dùng pipet hút 10 ml dung dịch tro đã chuẩn bị từ trước cho vào becher 250ml, thêm vào 5 ml NH4Cl, 1 ml acid citric và 2 giọt chỉ thị Bromocresol. Thêm 50 ml nước cất, lắc nhẹ dung dịch. Để lên bếp đun sôi nhẹ sau đó thêm 30ml (NH4)2C2O4 bão hòa (đã được làm nóng lên khoảng 700C từ trước), lắc nhẹ. Nếu xuất hiện kết tủa trắng thì thêm vài giọt HCl 1:1 để loại bỏ kết tủa tạp (nếu kết tủa không tan hết cũng không ảnh hưởng tới kết quả). Nhỏ từ từ dung dịch NH3 đậm đặc vào cho tới khi dung dịch chuyển từ màu vàng rơm sang màu xanh lam. Khi độ pH đạt từ 4.4-4.6, đậy becher bằng đĩa petri rồi ủ nóng trên bếp thủy phân ở nhiệt độ 900C trong 1 giờ, lấy ra khỏi bếp rồi tiếp tục ủ ở nhiệt độ phòng từ 1-3 giờ (có thể để qua đêm) để kết tủa lắng xuống.

Lọc lấy kết tủa bằng giấy lọc Whatman ∅15 (được gấp hình nón), rửa kết tủa và giấy lọc bằng nước cất nóng (khoảng 800C) cho đến khi hết ion Cl- (thử lại bằng dung dịch AgNO3

Cho giấy lọc có chứa kết tủa vào cốc 250 ml, thêm 80 ml H2SO4 5% (đã làm nóng lên khoảng 800C trước đó). Dùng bếp điện CB300 nâng nhiệt độ dung dịch lên khoảng 800C. Chuẩn độ nóng bằng KMnO4 0.05 N cho đến khi xuất hiện màu hồng nhạt bền trong khoảng 30 giây.

2.5.3. Tính toán kết quả

% Canxi = 𝟒𝟎.𝟎𝟖 ×𝑽𝟎

𝑽 × 𝟏𝟎𝟎

Trong đó:

V là thể tính KMnO4 dùng chuẩn độ

38 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

2.5.4. Kết quả thực nghiệm

Kết quả thực nghiệm được ghi nhận ngày 27/04/2021, dựa trên mẫu cám chăn nuôi, được ghi lại dưới bảng sau:

Bảng 2.9. Kết quả thực nghiệm hàm lượng canxi

Mẫu

Mẫu 1 Mẫu 2 Mẫu 3 Mẫu 4 Mẫu 5

Lần 1 (%) 3.72 3.70 1.34 2.67 3.54

39

2.6. Phân tích hàm lượng Phospho có trong thức ăn chăn nuôi 2.6.1. Vai trò và giá trị của phospho

Thiếu Phosphof (P) gây kém ăn ở gà con, chậm lớn, khối lượng xương giảm, xương mềm, mô sụn khó chuyển hóa thành xương, các xương bị cong. Tỷ lệ gây độc khoảng 3 – 5%.

2.6.2. Phương pháp phân tích hàm lượng phospho có trong thức ăn chăn nuôi bằng phương pháp quang phổ[10]

2.6.2.1. Phạm vi áp dụng

Áp dụng cho các mẫu nguyên liệu và thành phẩm thức ăn chăn nuôi

Phương pháp này áp dụng đối với thức ăn chăn nuôi có hàm lượng phospho nhỏ hơn 50 g/kg. Đây là phương pháp đặc biệt thích hợp cho việc phân tích những sản phẩm có hàm lượng phospho thấp. Đối với những sản phẩm có hàm lượng phospho cao hơn, nên áp dụng phương pháp phân tích trọng lượng sử dụng quinolin phosphomolipdat.

2.6.2.2. Tài liệu trích dẫn

Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 1525:2001 về Thức ăn chăn nuôi – Xác định hàm lượng phospho – Phương pháp quang phổ do Bộ Khoa học Công nghệ và Môi trường ban hành.

2.6.2.3. Nguyên tắc

Tro hóa mẫu thử và hòa tan trong axit, phần dung dịch hòa tan được làm cho lên màu với thuốc thử Molipdovanadat và đem đi đo độ hấp thụ ở bước sóng 430nm.

2.6.2.4. Dụng cụ và hóa chất

a. Dụng cụ

- Lò nung - Bếp điện

- Cân phân tích 4 số lẻ - Máy quang phổ khả kiến - Chén nung

- Cốc có mỏ 250 ml

- Bình định mức 1000 ml, 500 ml, 250 ml, 100 ml - Pipet bầu 25 ml, 10 ml

40 - Ống nghiệm thủy tinh có nắp

- Giấy lọc vàng

b. Hóa chất

- Dung dịch HCl 18% - HNO3 đậm đặc

- Dung dịch amoni heptamolipdat: hòa tan 20g amoni heptamolipdat tetraanydrat (NH4)6Mo7O24.4H2O bằng 100 ml nước cất nóng, thêm 2 ml dung dịch NH3 25%, định mức lên 200 ml bằng nước cất.

- Dung dịch amoni monovanadat: hòa tan 0.47 g amoni monovanadat NH4VO3 trong 100 ml nước cất nóng, thêm từ từ 1.4 ml HNO3 đậm đặc, định mức lên 200 ml bằng nước cất.

- Thuốc thử molipdo vanadat: trộn 200 ml dung dịch amoni heptamolipdat và 200 ml dung dịch amoni monovanadat, thêm 135 ml HNO3 đậm đặc trong bình định mức rồi pha loãng bằng nước cất đến vạch. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

- Dung dịch phospho tiêu chuẩn 1mg/ml: sấy KH2PO4 ở 1030C trong 1 giờ, lấy ra để nguội trong bình hút ẩm. Cân 4.394 g KH2PO4 hòa tan bằng nước cất trong bình định mức 1 lít.

2.6.2.5. Cách tiến hành

a. Dựng đường chuẩn:

Hút 50 ml dung dịch phospho tiêu chuẩn 1 mg/ml vào bình định mức 500 ml, thêm nước cất đến vạch để có dung dịch 100 𝜇g/ml

Dùng pipet hút lần lượt 5ml, 10ml, 20ml, 30ml, 40ml dung dịch phospho 100𝜇g/ml ở trên cho vào bình định mức 100 ml, định mức bằng nước cất đến vạch để có dung dịch có hàm lượng phospho lần lượt là 5 𝜇g/ml, 10 𝜇g/ml, 20 𝜇g/ml, 30 𝜇g/ml, 40 𝜇g/ml.

Từ các dung dịch chuẩn ở trên, dùng pipet hút lần lượt mỗi ống 10 ml cho vào 5 ống nghiệm. Dùng pipet khác thêm vào mỗi ống nghiệm 10 ml thuốc thử molipdo vanadat.

Làm mẫu trắng song song với mẫu thử (dùng set “blank” khi đo độ hấp thu trên máy quang phổ) bằng cách hút 10 ml nước cất và 10 ml molipdo vanadat vào ống nghiệm.

Lắc đều các ống nghiệm chứa mẫu trắng và mẫu chuẩn, để yên 20 phút ở 200C, sau đó đem đi đo độ hấp thu bằng máy quang phổ khả kiến Libra S6. Đo và ghi nhận độ hấp thu với từng dung dịch phospho chuẩn.

41

Dùng phương trình excel để lập đường chuẩn và lập phương trình hồi quy. Đường chuẩn phải là đường thẳng (R2≥ 0.999), phương trình hồi quy có dạng y= ax+b, trong đó x là hàm lượng phospho và y là độ hấp thu tương ứng.

Đường chuẩn được dựng sau mỗi lần pha dung dịch molipdo vanadat

b.Xác định mẫu thử

Cân khoảng 3 g mẫu (chính xác đến 0.0001), cho vào chén nung, tro hóa trong lò nung ở nhiệt độ 5500C trong 5 giờ, tro sau nung phải có màu trắng hoặc xám, nếu vẫn còn lẫn các hạt màu đen thì tiếp tục tro hóa cho tới khi trắng hoặc xám hoàn toàn. Chuyển tro vào cốc có mỏ 250 ml, thêm 50 ml HCl 18%, 50 ml nước cất và 2 đến 3 giọt HNO3 đậm đặc. Đem đun sôi trên bếp điện 30 phút, lấy ra để nguội.

Chuyển dung dịch trong cốc vào bình định mức 250 ml, tráng kỹ cốc, thêm nước đến vạch, lắc đều và lọc qua giấy lọc vàng để có dung dịch thử.

Tùy theo hàm lượng phospho dự đoán có trong mẫu mà pha loãng dung dịch thử ở trên cho thích hợp để lên màu và đo độ hấp thu

• Đối với các mẫu có hàm lượng phospho nhỏ hơn 1%: hút 25 ml dung dịch thử, định mức lên 100 ml

• Đối với các mẫu có hàm lượng phopho trong khoảng 1-3%: hút 10 ml dung dịch thử, định mức lên 100 ml.

• Đối với các mẫu có hàm lượng phospho trong khoảng 3-7%: hút 10 ml dung dịch thử, định mức lên 200 ml.

Từ dung dịch đã pha loãng ở trên, hút 10 ml cho vào ống nghiệm, sau đó dùng pipet khác hút 10 ml thuốc thử molipdo vanadat cho vào ống nghiệm.

Lắc đều, để yên 20 phút ở 200C, đem đi đo độ hấp thu bằng máy quang bổ Libra S6 ở bước sóng 430nm.

2.6.3. Tính toán kết quả

% Phospho = 𝑾 ×𝑲𝑷𝒍

𝟏𝟎𝟎×𝒎 × 𝟏𝟎𝟎

Trong đó:

W là hàm lượng phospho của mẫu thử sau pha loãng được tính từ phương trình hồi quy

42