a) Hàm lượng carbonyl được xác định theo phương pháp chuẩn độ dựa theo mô tả
của Smith (1967). Mẫu tinh bột (2g, khối lượng khô) thêm vào 100ml nước cất được đựng trong erlen 500ml. Hồ hóa mẫu bằng cách đun cách thủy trong bể nước sôi trong 20 phút, sau đó được làm mát về 40oC và điều chỉnh pH về 3,2 với HCl 0,1N. Thuốc thử hydroxylamine (15ml) được thêm vào hỗn hợp. Đặt erlen phản ứng trong bể điều nhiệt ở 40oC trong 4 giờ với tốc độ khuấy chậm. Kết thúc phản ứng, lượng dư hydroxylamine được xác định bằng phương pháp chuẩn độ hỗn hợp với HCl 0,1N chuẩn cho đến giá trị pH hỗn
17
hợp là 3,2. Mẫu trắng được thực hiện tương tự chỉ với thuốc thử hydroxylamine và HCl 0,1N. Thuốc thử hydroxylamine được chuẩn bị bằng cách hòa tan 25g hydroxylamine hydrochloride trong 100ml dung dịch NaOH 0,5N và sau đó được điều chỉnh thành 500ml với nước cất. Hàm lượng carbonyl được biểu thị bằng số lượng nhóm carbonyl trên 100g đơn vị glucose (CO/100GU), tắnh theo phương trình.
𝐶𝑂/100𝐺𝑈 = (𝑉𝑏−𝑉𝑠) È𝑀 È0.028È100
𝑊 (2.2)
Trong đó: Vb là thể tắch HCl sử dụng trong mẫu trắng (ml), Vs là thể tắch HCl sử dụng trong các mẫu (ml), M là nồng độ HCl, W là khối lượng mẫu khô (g).
Phản ứng của NH2OH với một aldehyde hoặc ketone tạo ra một oxime.
R2C=O + HONH 2.HCl + NaOH → R2C=NOH + NaCl + 2H2O (2.3)
HONH 2 + HCl → HONH2.HCl (2.4)
b) Hàm lượng carboxyl của tinh bột bị oxy hóa được xác định theo phương pháp của
Chattopadhyay, Singhal, and Kulkarni (1997). Cân chắnh xác (2g, khối lượng khô) mẫu tinh bột, trộn với 25mL HCl 0,1N, và hỗn hợp được khuấy thỉnh thoảng trong 30 phút với máy khuấy từ. Sau đó tinh bột được rửa sạch HCl 4 lần bằng cách ly tâm hỗn hợp tại 3000 È g trong 10 phút, phần dịch nổi được thử nghiệm định tắnh Cl- với AgNO3. Tinh bột sau đó được chuyển cẩn thận vào cốc 500 mL và thể tắch được điều chỉnh đến 300 mL bằng nước cất. Tinh bột được đun nóng trong bể nước sôi với khuấy liên tục trong 20 phút để đảm bảo gelatin hóa hoàn toàn. Hồ tinh bột nóng sau đó được điều chỉnh đến 450 mL bằng nước cất và được chuẩn độ đến giá trị pH là 8,3 với dung dịch NaOH 0,01 mol/L chuẩn. Mẫu trắng được thực hiện với tinh bột chưa biến tắnh. Hàm lượng carboxyl được biểu thị bằng số lượng nhóm cacboxyl trên 100 glucose đơn vị (COOH/100 GU), được tắnh bằng phương trình 2.2
𝐶𝑂𝑂𝐻
100𝐺𝑈
⁄ = (𝑉𝑠−𝑉𝑏) È𝑀 È0.045 È100
𝑊 (2.5)
Trong đó: Vs là thể tắch NaOH cần dùng cho mẫu thử (ml), Vb là thể tắch NaOH sử dụng trong mẫu trắng (ml), M là nồng độ mol/l của NaOH, W là khối lượng mẫu (g).