sắc ký khác.
Khảo sát qua nhiều lần thực nghiệm, chúng tôi nhận thấy các thông số sau là thích hợp để sắc ký đồ tách vết hoàn toàn, rõ nét, pic thu đƣợc đẹp, cân đối, hệ số Rf nằm trong khoảng tin cậy:
- Hoạt hóa bản mỏng: ở 100oC trong 30 phút.
- Độ rộng vết mẫu khi chấm: 4 – 5 mm.
- Khoảng cách từ vết mẫu đầu tiên đến mép bên của bản mỏng tối thiểu 1 cm để tránh hiệu ứng bờ, khoảng cách từ đƣờng xuất phát đến cạnh dƣới của bản mỏng là 1cm, quãng đƣờng pha động chạy tính từ điểm xuất phát là 7 cm.
- Tốc độ phun mẫu tự động là 30 nl/s.
- Nhiệt độ phân tích: 20 – 25oC.
Nhƣ vậy, điều kiện tối ƣu để bán định lƣợng 3 thành phần B1, B6, B12 là:
- Bản mỏng HPTLC silica gel 60 F254 (MERCK), hoạt hóa ở 100oC trong 30 phút.
- Pha động: EtOH – chloroform – acid acetic – amoniac – nƣớc, 6:5:5:1:1.
- Thể tích mẫu đƣa lên bản mỏng: 4 – 5µl.
- Độ rộng vết chấm, vị trí vết chấm: nhƣ hình 3.3.
- Tốc độ phun mẫu tự động là 30 nl/s.
- Nhiệt độ phân tích: 20 – 25oC.
- Phát hiện vết: vết B1, B6 phát hiện ở bƣớc sóng 366 nm, vết B12 phát hiện ở ánh sáng khả kiến. - Xử lý kết quả: bằng phần mềm VideoScan. 7 cm 1 cm 1cm 0,5 cm
Tuyến dung môi
Vết mẫu chấm
Hình 3.3: Vị trí chấm mẫu trên bản mỏng HPTLC silica gel 60 F254 kích thước 20 x 10 cm
3.3. Đánh giá phƣơng pháp phân tích 3.3.1. Bán định lƣợng B1 và B6