của mẫu
Vào mẫu là một khâu quan trọng giúp chúng ta có được nguồn mẫu sạch, là nguyên liệu cho mọi quá trình khác ttong quá trình nhân nhanh in vỉtro. Với điều kiện thực tế cho phép, chứng tôi nghiên cứu phương pháp khử trùng quả lan. Quá trình khử trùng quả lan được tóm tắt qua hình 2:
2 5
r ^
A: Khử trùng quả trong dung dịch Javen; B, c, D, E: Gắp quả, cắt ra lấy hạt và cấy vào môi trường đã chuẩn bị sẵn; F: Hạt lan sau khi gieo một tháng.
Quả lan là môi trường tương đối sạch bệnh, bảo vệ hạt lan khỏi sự xâm nhập của vi sinh vật. Mẩu bị nhiễm chủ yếu do khử trùng bề mặt quả chưa tốt. Sau 10 ngày nuôi cấy chúng tôi thu được kết quả thể hiện ở bảng 3.1.
Bảng 3.1: Kết quả nghiên cứu khử trùng của dung dịch Ca(OCl2)2 đến tỷ lệ sổng của hạt lan Phỉ điệp tím (sau 10 ngày nuôi cấy)
Công thức Số bình nuôi Số mẫu sống Số mẫu nhiễm và chết Tỷ lệ sống(%) Tỷ lệ nhiễm và chết (%) CT1 150 95 55 63,33 36,67 CT2 150 142 8 94,67 5,33 CT3 150 126 24 84,00 16,00
Dựa vào kết quả bảng 3.1, khử trùng ở các nồng độ khác nhau cho hiệu quả khử trùng khác nhau. Xử lí ở nồng độ dung dịch Ca(OCl2)2 thấp (20%) thì tỉ lệ mẫu nhiễm và chết cao nhất (36,67%) (hình 3B); khi tăng nồng độ Ca(OCl2)2 lên (50%) tỉ lệ mẫu sống cao (94,67%) (hình 3A), tỉ lệ mẫu nhiễm và chết thấp (5,33%). Tuy nhiên khi tiếp tục tăng nồng độ hóa chất lên (100%), thì tỉ lệ mẫu nhiễm và chết lại tăng lên (16%), nguyên nhân của hiện tượng này do hóa chất nồng độ cao gây ảnh hưởng đến khả năng sống của mẫu. Theo Vũ Ngọc Lan và Nguyễn Thị Lý Anh, sử dụng cồn kết hợp với HgCl2khử trùng quả lan cũng cho kết quả rất tốt, tỉ lệ cây sống đạt 97% [10]. Tuy nhiên xét về độ an toàn, chúng tôi thấy Ca(OCỈ2)2 an toàn, ít độc hại hơn, vì yậy chúng tôi sử dụng Ca(OCl2)2 thay vì HgCl2 mà hiệu quả khử trùng cũng đạt kết quả cao.
Qua phân tích kết quả trên, chúng tôi thấy nồng độ thích hợp để khử trùng mẫu là Ca(OCl2)2 50%, với tỉ lệ mẫu sống là 94,67%, tỉ lệ nhiễm và chết là 5,33%.
2 6
A: Mẩu nảy mầm sau khi cấy 40 ngày; B: Mẩu nhiễm, chết.