- Gen env mã hóa protein trong cấu trúc vỏ của virus Trật tự của các nhóm gen
Hệ thống Cre-LoxP là phổ biến nhất và được sửdụng trong nhiều nghiên cứu
CHƯƠNG 6 - KỸ THUẬT BIẾN ĐỎI GEN ĐỘNG VẬT VECTOR SÁP XÉP LẠI CÁC GEN ĐÍCH VECTOR SÁP XÉP LẠI CÁC GEN ĐÍCH
Hai hệ thống đều cần sự có mặt của enzyme recombinase.
Các tế bào động vật có vùng DNA tiếp giáp với các trình tự LoxP không có recombinase. Các enzyme này có thể được bổ sung vào trong tế bào ín vifro
hoặc ín vivo ở động vật chuyển gen bằng cách vi tiêm trực tiếp vào tế bào chất hoặc bằng phương pháp chuyền nhiễm (transfection method) đối với protein.
Gen recombinase có thể được đưa vào tế bào bằng vector adenovirus. Các vector này được tiêm vào mô của động vật chuyên gen mang vùng DNA tiếp giáp với các trình tự LoxP.
Plasmid chứa các gen recombinase cũng có thể được đưa vào phôi giai đoạn một
tế bào hoặc vào các tế bào soma. Các plasmid này không hợp nhất được do cấu trúc dạng vòng của chúng. Chúng biến mắt nhanh chóng trong quá trình nhân tế bào và sự có mặt của recombinase là nhất thời.
Các recombinase cũng có thể được truyền cho động vật chuyển gen bằng sự chuyển gen. Chuột chuyển gen mang gen recombinase có thể được lai với các
CHƯƠNG 6 - KỸ THUẬT BIẾN ĐỎI GEN ĐỘNG VẬT VECTOR SÁP XÉP LẠI CÁC GEN ĐÍCH VECTOR SÁP XÉP LẠI CÁC GEN ĐÍCH
Cần tránh sự biểu hiện cao của gen recombinase do có độc tính đối với tế bào ở
nông độ cao.
Các phương thức kiểm soát sự biểu hiện của gen recombinase:
- Các promoter đặc hiệu đối với từng mô có thể hạn chế sự tái tổ hợp LoxP
trong tế bào mà các promoter này hoạt động. Hệ thống biểu hiện này đượckiểm soát bởi tetrecycline và các dẫn xuất của tetracycline, cho phép gen recombinase chỉ được biểu hiện trong một loại tế bào và chỉ khi động vật có †etracycline.
-_ Các gen dung hợp mang trình tự mã hoá recombinase Cre đi kèm với một phần các thụ quan steroid: Protein dung hợp này chỉ hoạt động khi có mặt steroid và steroid đã gây ra sự biến đổi cầu hình không gian của protein.
-_ Trình tự NLS (nuclear localization signal = tín hiệu định vị nhân) cho phép