- Gen env mã hóa protein trong cấu trúc vỏ của virus Trật tự của các nhóm gen
yếu tố của chúng không hoạt động trong các tế bào động vật Các vector này được sử dụng chủ yếu là để xây dựng DNA và tạo DNA tái tổ hợp để nghiên
cứu và chuyển vào tế bào động vật.
CHƯƠNG 6 - KỸ THUẬT BIẾN ĐỎI GEN ĐỘNG VẬT VECTOR SỬ DỤNG ĐẺ THÊM GEN - NHÓM 1 VECTOR SỬ DỤNG ĐẺ THÊM GEN - NHÓM 1
1.6. VECTOR EPISOME
Vector YAC dạng thẳng chứa các telomere, một khởi điểm tái bản (ARS 1), một tâm động (CEN 4), một gen chọn lọc (Ura 3) và các vị trí tạo dòng.
Vector này tương đối ngắn và dễ thao tác do khởi điểm tái bản và tâm động ngắn.
Khởi điểm tái bản của nắm men Saccharomyces cerrevisae được tập trung trong
một vùng genome ngắn trong khi ở Saccharomyces pombe khởi điểm tái bản dài
đến trên vài nghìn base.
Vector YAC có thể mang các đoạn DNA dài 1000kb và chúng có thể được thiết kế
trong nắm men bằng tái tổ hợp tương đồng.
Hạn chế chủ yếu của vector YAC là không ổn định (Giraldo và Montoliu, 2001). vị trí tạo đồng
\
TRP1 ARSI CEN4 URA3
telomere telomere 62
CHƯƠNG 6 - KỸ THUẬT BIẾN ĐỎI GEN ĐỘNG VẬT VECTOR SỬ DỤNG ĐẺ THÊM GEN - NHÓM 1 VECTOR SỬ DỤNG ĐẺ THÊM GEN - NHÓM 1
1.6. VECTOR EPISOME
Vector BAC đã được thiết kế để tái bản trong E.coli và chỉ hiện diện một bản sao trong
mỗi tế bào. promoter
=k£E r
CHẾ
: _ Ä mỹ SacBII
Chúng có thê mang các đoạn \
DNA có kích thước lên đến sriF 115 kb
“HOKH: : | Cắt bằng enzym hạn chế E,
Chúng có thê được xây dựng
trong vi khuẩn bằng tái tổ hợp | Nối với đoạn ADN ngoại lai
tương đồng cho phép cả việc (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
đưa các đoạn DNA ngoại lai Ppromoter Doạn ADN ngoại lai được xenvào sacBli vào trong vector cũng như s, mm
loại bỏ chúng đi.
Cm(R) 0riF
Vector BAC hiện là công cụ tốt nhất cho việc chuẩn bị các cấu trúc mang các đoạn DNA
có kích thước lớn đê dùng cho việc tạo động vật chuyên gen (Giraldo và Montoliu,
CHƯƠNG 6 - KỸ THUẬT BIẾN ĐỎI GEN ĐỘNG VẬT VECTOR SỬ DỤNG ĐẺ THÊM GEN - NHÓM 1 VECTOR SỬ DỤNG ĐẺ THÊM GEN - NHÓM 1
1.6. VECTOR EPISOME
Vector Episome virus - ví dụ ở virus EBV.
Virus Epstein-Barr (EBV) có khởi điểm tái bản và một hệ thống tâm động giả (pseudocentromeric system):
+ Các vùng có kích thước nhỏ nhất cần
thiết cho sự tái bản của genome EBV và
sự di truyền của chúng cho các tế bào
con là vùng khởi điểm tái bản P (ori P) và
gen EBN A 1 (Epstein-Barr nuclear
antigen). Vùng khởi điểm tái bản P chứa
hai vùng có chức năng riêng biệt. Cả hai đều bám vào protein EBN A 1. Một vùng
của khởi điểm tái bản P làm đúng chức
năng khởi điểm tái bản.
» Vùng thứ hai là cần cho sự truyền
protein BBP2
genome của virus cho các tế bào con.
CHƯƠNG 6 - KỸ THUẬT BIẾN ĐỎI GEN ĐỘNG VẬT VECTOR SỬ DỤNG ĐẺ THÊM GEN - NHÓM 1 VECTOR SỬ DỤNG ĐẺ THÊM GEN - NHÓM 1
1.6. VECTOR EPISOME
Vector Episome virus - ví dụ ở virus EBV.
Các virus này có khởi điểm tái bản và một hệ thống tâm động giả (pseudocentromeric
system). Hai yếu tố này đã được nghiên cứu một cách chỉ tiết ở virus Epstein-Barr (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
(EBV).
+ Các vùng có kích thước nhỏ nhất cần thiết cho sự tái bản của genome EBV và sự
di truyền của chúng cho các tế bào con là vùng khởi điểm tái bản P (ori P) và gen
EBN A 1 (Epstein-Barr nuclear antigen). Vùng khởi điểm tái bản P chứa hai vùng
có chức năng riêng biệt. Cả hai đều bám vào protein EBN A 1. Một vùng của khởi
điểm tái bản P làm đúng chức năng khởi điểm tái bản.
+ Vùng thứ hai là cần cho sự truyền genome của virus cho các tế bào con.
Các kết quả nghiên cứu đã cho tháy rằng khởi điểm tái bản của EBV chỉ hoạt động ở tế bào Linh trưởng và chó. Khởi điểm tái bản EBV có thể bị mắt và được thay thế bằng
các đoạn DN A genome người hoặc các động vật có vú khác. Một số các đoạn DNA
genome này chứa một khởi điểm tái bản cho phép vector tái bản và truyền lại cho
các tế bào con ngay cả ở chuột chuyển gen (Kelleher, 1998). Tuy nhiên vẫn chưa có bằng chứng chứng minh rằng các vector ổn định và đã truyền lại cho thế hệ con.
CHƯƠNG 6 - KỸ THUẬT BIẾN ĐỎI GEN ĐỘNG VẬT CÁC VECTOR SỬ DỤNG ĐẺ CHUYÊN GEN Ở ĐỘNG VẬT CÁC VECTOR SỬ DỤNG ĐẺ CHUYÊN GEN Ở ĐỘNG VẬT
Phân loại theo mục đích tao vector
- _ Vector sử dụng để thêm gen (Nhóm 1)
-_ Vector thay thế gen (Nhóm 2).
- _ Vector sắp xếp lại các gen đích (Nhóm 3).
CHƯƠNG 6 - KỸ THUẬT BIẾN ĐỎI GEN ĐỘNG VẬT