I) I II IV) V)
3.2.3. Định tính cắn phân đoạn EtOAc bằng SKLM
Dịch chấm sắc ký: cắn phân đoạn EtOAc hịa tan hồn tồn bằng MeOH.
Tiến hành thăm dị với các hệ dung mơi:
Hệ I : Toluen: ethyl acetat: acid formic (5:3:1) Hệ II : Toluen: ethyl acetat: acid formic (5:6:1) Hệ III : Cloroform: methanol (8:2)
Hệ IV : Cloroform: methanol (9:1)
Sau khi triển khai sắc kí thấy hệ III cho kết quả tách tốt nhất. Cắn phân đoạn ethyl acetat được triển khai với hệ dung môi III và quan sát ở các điều kiện khác nhau. Kết quả thể hiện ở hình 3.4 và bảng 3.4.
1) 2) 3) 4)
Hình 3.4. Sắc kí đồ của cắn EtOAc với hệ dung môi III
1) không phun TT, AST 2) không phun TT, UV254nm
Bảng 3.4. Màu sắc và giá trị Rf của cắn phân đoạn EtOAc trên SKLM với hệ dung mơi III.
STT Khơng có thuốc thử Có thuốc thử
Rf x100
AST UV254nm UV365nm AST
1 Đen++ XD+ Đỏ++++ 8,90 2 Đen++ XD++ Đỏ++ 13,30 3 Đen+ XD+ Đỏ+ 22,20 4 Đen++ XDT+++ 33,30 5 Đen+ XD+ 44,40 6 Đen++ XDT++++ Nâu+ 51,10 7 Đem+++ XD++++ Đỏ+++ 57,80 8 Đen+ XD++ 62,20 9 Đen++ XD++ 66,70 10 XD+ 77,40 11 XD++++ 86,70 Chú thích: +: rất mờ ++: mờ +++: rõ ++++: rất rõ
Khi chưa phun thuốc thử:
Ở ánh sáng thường: khơng có vết nào.
Ở bước sóng 254nm: có 9 vết.
Ở bước sóng 365nm: có 11 vết. Sau khi phun thuốc thử :
Ở ánh sáng thường: có 5 vết.
Trong các vết, nhận thấy một số vết đáng lưu ý:
+ Vết số 6 quan sát được rất rõ thấy màu xanh dương trắng ở UV365nm, màu đen ở UV254nm, màu nâu sau khi phun thuốc thử.
+ Vết số 7 quan sát được rất rõ thấy màu xanh dương ở UV365nm, màu đen ở UV254nm, màu đỏ sau khi phun thuốc thử.
+ Vết số 11 quan sát được rất rõ màu xanh dương ở UV365nm, không thấy xuất hiện ở UV254nm, sau khi phun thuốc thử.
3.3. PHÂN LẬP
Sử dụng sắc ký cột với chất hấp phụ là silicagel để phân lập cắn phân đoạn n-hexan và cắn phân đoạn ethyl acetat.