Phân phối chuẩn Phân phối không chuẩn
2.5.2. Quy trình nghiên cứu
2.5.2.1. Lấy mẫu và phân tích mẫu
- Các mẫu bệnh phẩm được thu thập và xử lý đúng cách phù hợp với thực hành thông thường đối với bệnh phẩm của bệnh nhân.
Phân tích mẫu máu của trẻ sơ sinh khỏe mạnh được chỉ định sàng lọc rối loạn chuyển hóa
Thu thập và xử lý dữ liệu Phát hiện và loại bỏ các số lạc Kiểm tra tính chuẩn Phương pháp tham số Phương pháp phi tham số Kết luận
Phương pháp lấy mẫu
Mẫu máu thấm khô được thu thập từ gót chân của trẻ sơ sinh không có bất thường về chuyển hóa. Thu thập đủ lượng máu vừa đủ các vòng tròn trên giấy thấm, để máu khô tự nhiên nơi thoáng sạch ở nhiệt độ phòng ít nhất 4 giờ, tránh ánh sáng mặt trời, và hơi nóng chiếu trực tiếp lên mẫu. Mẫu máu được chuyển về phòng xét nghiệm trong vòng 24h.
Phân tích mẫu
Tiến hành phân tích các mẫu máu thấm khô: định lượng acid amin, acylcarnitine bằng phương pháp MS/MS
Chuẩn bị các dung dịch nội chuẩn gốc
1. Để lọ chất nội chuẩn và dung dịch chiết về nhiệt độ phòng (18 đến 25°C)
2. Thêm vào lọ chất nội chuẩn acid amin (AA) 1 mL dung dịch chiết và lắc kỹ đến khi tan hết trong 30 phút bằng máy lắc
3. Thêm vào lọ chất nội chuẩn acylcarnitines (AC) 1 mL dung dịch chiết và lắc kỹ đến khi tan hết trong 30 phút bằng máy lắc.
Chuẩn bị dung dịch làm việc hàng ngày: Các dung dịch làm việc hàng ngày được chuẩn bị bằng cách pha loãng các dung dịch chất nội chuẩn đã hòa tan ở trên theo tỉ lệ 1: 100 (v/v) bằng dung dịch chiết.
Chuẩn bị mẫu: Các lọ dung dịch hóa chất, nội chuẩn được để ở nhiệt độ phòng ( 20°C đến 25°C) ít nhất 30 phút trước khi bắt đầu làm xét nghiệm.
Các bước thực hiện
1. Sử dụng máy đục lỗ DBS 100, cắt hình tròn đường kính 3 mm từ mẫu máu thấm khô của bệnh nhân vào các giếng tương ứng trên khay có đáy chữ U
2. Cắt hình tròn đường kính 3 mm của ba mẫu QC ba mức vào các giếng tương ứng trên khay có đáy chữ U, lặp lại mỗi mức QC hai giếng
3. Thêm 100 uL thuốc thử hàng ngày (chứa chất nội chuẩn) vào mỗi giếng có mẫu máu thấm khô.
4. Đậy khay bằng tấm dính và ủ trên máy lắc 20 phút với tốc độ lắc 650 vòng/ phút. Chú ý đảm bảo sau khi xong chuyển ngay sang bước tiếp theo.
5. Chuyển 70 uL dịch chiết từ mỗi giếng chữ U sang giếng tương ứng của khay
đáy chữ V. Đậy khay bằng tấm nhôm để tránh bay hơi.
6. Đưa khay đã được đậy tấm nhôm vào bộ phận bơm mẫu tự động máy
LCMSMS 8040
7. Lựa chọn các mẫu cần chạy và ấn nút để chạy các mẫu. Đảm bảo bơm dung môi đã được bật trước khi chạy. 2.5.2.3. Thu thập và xử lý dữ liệu
- Các giá trị tham chiếu đã được kiểm tra và phân tích trên SPSS 20, tất cả các thử nghiệm thống kê được cho là có ý nghĩa với p < 0,05 (hai mặt)
- Các số lạc được phát hiện dựa trên phương pháp Tukey và sau đó loại bỏ các giá trị này
- Đánh giá phân phối dữ liệu dựa trên các kiểm tra biểu đồ và quy tắc. Số lượng đối tượng là hơn 50 vì vậy có thể sử dụng thử nghiệm Kolmogorov- Smirnov để kiểm tra tính chuẩn. Ở giá trị p>0.05 phân phối dữ liệu tuân theo phân phối xác suất chuẩn và các trường hợp khác thì không. Từ đó giá trị trung bình X và độ lệch chuẩn SD đã được tính toán.
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});