Tanshinon IIA thu được có độ tinh khiết cao trên cơ sở khảo sát TLC và đặc biệt là sắc kí lỏng hiệu năng cao HPLC. Phương pháp HPLC với detecter DAD được xây dựng dùng để xác định giới hạn tạp chất liên quan và có thể dùng để định tính, định lượng tanshinon IIA tinh chế. Kết quả xác định giới hạn tạp chất liên quan cho thấy sản phẩm tanshinon IIA tinh chế có giới hạn tổng cộng các tạp chất liên quan không quá 5,0 % đáp ứng tiêu chuẩn làm chất chuẩn đối chiếu.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
Sau quá trình nghiên cứu chúng tôi đã hoàn thành các mục tiêu của khóa luận tốt nghiệp với các kết quả thu được như sau:
- Đã chiết xuất và phân lập được tanshinon IIA từ đan sâm.
- Tinh chế để làm tăng độ tinh khiết của tanshinon IIA phân lập được để thiết lập chất chuẩn, chất đối chiếu.
- Xác định được cấu trúc tanshinon IIA sử dụng các phương pháp phổ. Dữ liệu nhận dạng của tanshinon IIA bao gồm đặc điểm vật lý, dữ liệu phổ khối và phổ cộng hưởng từ.
- Bước đầu thiết lập được tanshinon IIA làm chất chuẩn đối chiếu trong kiểm nghiệm dược liệu với những tiêu chuẩn chất lượng về:
+ Độ tinh khiết: 96,57% (>95%)
+ Tạp chất liên quan: 3,43% (<5%)
Các kết quả thu được làm tiền đề cho các nghiên cứu tiếp theo của bao gồm: - Xây dựng và đánh giá quy trình định lượng tanshinon IIA tinh chế được bằng HPLC: Đánh giá các chỉ tiêu bao gồm: Tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ lặp lại và độ đúng, LOD, LOQ.
- Tiếp tục nghiên cứu để xác định cụ thể các tạp chất và cách để loại tối đa các tạp đó để tăng độ tinh khiết cho tanshinon IIA làm chất chuẩn đối chiếu.
- Đánh giá chất chuẩn thông qua 3 phòng thí nghiệm đạt tiêu chuẩn GLP/ISO.
- Nghiên cứu độ ổn định của chất chuẩn đối chiếu trong điều kiện bảo quản 2-8oC.
- Ứng dụng các chất chuẩn đối chiếu thiết lập được để đánh giá chất lượng một số dược liệu và chế phẩm đông dược.
TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT
1. Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương và cs (2004), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam, tập I, Nxb. Khoa học và kỹ thuật, Hà Nội, tr. 732- 738.
2. Lê Đình Bích, Trần Văn Ơn (2007), Thực vật học, Nxb. Y học, Hà Nội, tr. 390- 400.
3. Bộ Y tế, Vụ khoa học và đào tạo (2006), Dược học cổ truyền, Nxb. Y học, Hà Nội, tr. 231-232.
4. Bộ Y tế, Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương (2007), Đảm bảo chất lượng thuốc và một số phương pháp kiểm nghiệm thuốc, tr. 107–113, tr. 216-250.
5. Bộ Y tế, Vụ khoa học và đào tạo (2007), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất bản Y học, tr. 79-82, 84-110.
6. Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nxb. Y học, Hà Nội, tr. 751-752, PL 129, PL 131, PL 239, PL 5.3.
7. Bộ Y tế (2011), Dược liệu học I, Nxb. Y học, Hà Nội, tr. 255-256.
8. Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hoá học cây thuốc, Nhà xuất bản Y học, tr. 8-99, 162-196, 234-242.
9. Đỗ Thị Hà, Lê Thị Loan, Nguyễn Minh Khởi, Trần Thị Hồng Phương (2016). Xây dựng phương pháp định lượng tanshinon IIA trong dược liệu đan sâm trồng ở Việt Nam bằng HPLC-DAD. Tạp chí Dược liệu 21, 50-54.
10. Nguyễn Thị Minh Hằng (2001), Nghiên cứu tác dụng chống đông máu và hạ lipid máu của đan sâm và bài thuốc sinh hóa thang, Đại học Dược Hà Nội.
11. Nguyễn Thị Thu Hòa (2012), Nghiên cứu tiêu chuẩn cao đặc hỗn hợp hoàng kỳ và đan sâm, Luận văn thạc sĩ dược học, Đại học Dược Hà Nội.
12. Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, tập II, Nxb. Trẻ, tr. 865-866.
13. Vũ Thị Thăng Long (2007), Nghiên cứu định lượng Tobramycin nguyên liệu bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), Khoá luận tốt nghiệpdược sĩ đại học.
14. Đỗ Tất Lợi (2005), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, Nxb. Y học, Hà Nội, tr. 818-820.
15. Ngô Quốc Luật, Trần Danh Việt, Đào Văn Núi (2014). Nghiên cứu di thực cây đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge) tại Việt Nam. Tạp chí Dược học 54 (4), 687-691.
16. Ngô Quốc Luật, Trần Danh Việt, Lê Tiến Vinh, Phương Thiện Thương (2014). Đánh giá chất lượng dược liệu đan sâm di thực trồng tại Việt Nam. Tạp chí Dược học 455, 47-51.
17. Thái Phan Quỳnh Như (2001), Phương pháp phân tích bằng sắc ký lỏng hiệu năngcao (HPLC), Viện kiểm nghiệm Bộ y tế.
18. Viện Dược liệu (2006), Nghiên cứu thuốc từ thảo dược, Nhà xuất bảnkhoa học và kỹ thuật tr. 199 – 222; 493 – 685.
19. Trường Đại học Dược Hà nội, Bộ môn hoá phân tích (2006), Hoá phân tích II, tr. 17, 99-146, 173-222.
20. Hoàng Duy Tân, Trần Văn Nhủ (2001), Từ điển phương thang đông y, Nhà xuất bản Đồng Nai.
21. Phương Thiện Thương, Nguyễn Thị Kim An, Nguyễn Minh Khởi, Fumiaki Ito (2013). Các tanshinon phân lập từ rễ cây đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge) di thực và trồng ở Việt Nam. Tạp chí Dược học 53 (1), 44-47.
22. Nguyễn Hữu Tùng, Nguyễn Thanh Hải, Vũ Đức Lợi, Bùi Thanh Tùng, Nguyễn Tiến Vững, Bùi Hồng Cường (2016). Một số hợp chất phân lập từ rễ cây đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge) trồng ở huyện Bắc Hà, tỉnh Lào Cai. Tạp chí Dược học 56 (4), 43-47.
23. Nguyễn Hữu Tùng, Vũ Đức Lợi, Bùi Thanh Tùng, Lê Quốc Hùng, Dương Thị Ly Hương, Nguyễn Thanh Hải (2016). Thành phần triterpene năm vòng khung ursane phân lập từ rễ cây Đan sâm trồng ở Việt Nam. Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoahọc Y Dược 32 (2), 33-36.
24. Vũ Phương Xuân (2000), Thực vật chí Việt Nam, tập II, Nxb. Khoa học và kỹ thuật, tr. 115-126.
25. Đỗ Thị Xuyến, Vũ Xuân Phương (2013), “Bổ sung loài Salvia japonica Thunberg (họ BẠc Hà- Lamiaceae) cho hệ thực vật Việt Nam”, Tạp chí sinhhọc (35), tr. 41- 44.
TIẾNG ANH
26. Wang BQ (2010). Salvia miltiorrhiza: Chemical and pharmacological review of a medicinal plant. Journal of Medicinal Plants Research 4 (25), 2813-2820.
27. Dai Hui, Xiao Chaoni, Liu Hongbing, Tang Huiru (2009), “Comnined NMR and LC- MS Analysis Reveals the Metanonomic Changes in Salvia miltiorrhiza Bunge Induced by Water Depletion”, Journal of Proteome Research, 9(3), pp. 1460-1475.
28. Li Min Hui, Li Qian Quan, Liu Yan Ze, Cui Zhan Hu, Zhang Na, Huang Lu Qi, Xiao Pei Gen (2013), “Pharmacophylogenetic Study on Plants of Genus Salvia
L. from China”, Chinese Herbal Medicines, 5(3), pp. 164-181.
29. Zhou L, Zuo Z, Chow MS (2005). Dansen: An overview of its chemistry, pharmacology, pharmacokinetics, and clinical use. The Journal of Clinical Pharmacology 45 (12), 1345-1359.
30. Chase Mark W.(2009), “An update of the Angiosperm Phylogeny Group classification for the orders and families of flowering plants: APG III”, Botanical Journal of the Linnean Society, 161, pp. 105-121.
31. Kintzios Spiridon E (2003), Sage: the genus Salvia, CRC Press, pp. 9-18, 55- 66,143-174.
32. Nicolin Vanessa, Fancellu Giovanni, Valentini Roberto (2014), “Effect of tanshinone II on cell growth of breast cancer cell line type MCF-7 and MD- MB- 231”, IJAE, 119(1), pp. 38-43.
33. Xu Yan Yan, Wan Ren Zhong, Lin Yan Ping, Yang Ling, Chen Yong, Liu Chang Xiao (2007), “Recent advance on research and atrlication of Salvia miltiorrhiza”,
Asian Journal of Pharmacodynamics and Pharmacokinetics, 7(2), pp. 99-130. 34. Ikeshiro Yasumasa, Mase Izumi, Tomita Yutaka (1989), “Abietane type diterpenoids
from Salvia miltiorrhiza”, Phytochemistry, 28(11), pp. 3139-3141. (8)
35. Lu Yinrong, Yeap Foo L. (2002), “Polyphenolics of Salvia—a review”,
Phytochemistry, 59(2), pp. 117-140.
36. Xu YY et al. (2007). Recent advance on research and atrlication of Salvia miltiorrhiza.
PHỤ LỤC
Phụ lục 01 Phổ ESI-MS của tanshinon IIA
Phụ lục 02 Một số hình ảnh sắc ký lớp mỏng của tanshinon IIA Phụ lục 03 Khảo sát điều kiện sắc kí Phụ lục 04 Độ thích hợp hệ
thống
Phụ lục 02.Một số hình ảnh sắc ký lớp mỏng của tanshinon IIA