Với mô hình thí nghiệm được mô tả trong phần phương pháp nghiên cứu, kết quả khối lượng chuột được thể hiện trong bảng 3.4 dưới đây:
Bảng 3.3. Tác dụng của dịch chiết cây Xấu hổ đối với trọng lượng chuột bị tiể u đường do STZ gây ra Đơn vị: g Nhóm 1: Nhóm chứng sinh lý Nhóm 2: STZ + không điều trị Nhóm 3: STZ+ gliclazide Nhóm 4:STZ+xấu hổ- 150mg/kg Nhóm 5: STZ + xấu hổ- 300mg/kg
Sự khác nhau về chỉ số đường huyết của chuột bình thường và béo phì được thể hiệ n qua bảng 3.5 như sau:
Bảng 3.4. Chỉ số glucose ở chuột ĐTĐ do STZ gây ra trước và sau 22 ngày điều trị bằng lá cây Xấu hổ Nhóm Nhóm 1: Nhóm chứng sinh lý Nhóm 2: STZ + nước cất Nhóm 3: STZ+ gliclazide Nhóm 4: STZ+ cao chiết -150mg/kg Nhóm 5: STZ + cao chiết-300mg/kg *
Khác biệt có ý nghĩa so với nhóm 2; # Khác biệt có ý nghĩa so với nhóm 1.
Kết quả tác dụng cao chiết nước lá cây Xấu hổ lên nồng độ glucose huyết và trọng lượng chuột được trình bày ở bảng 3.4 và 3.5. Nhìn vào bảng cho thấy, ở nhóm chứng sinh lý,
chứng bệnh không điều trị có sự tăng cao về nồng độ glucose huyết (tăng 21,4 %) và trọng lượng cơ thể (tăng 11,49%) so với trước điều trị. Nhóm chứng được điề u trị bằng
gliclazide giảm nồng độ glucose huyết (giảm 20,89%) và trọng lượng cơ thể (giảm 16,36%) đáng kể. Nhóm chuột được cho uống cao chiết nước lá cây Xấu hổ ở cả hai liều 150mg/kg và 300mg/kg thể trọng đều làm giảm đáng kể nồng độ glucose huyết và
trọng lượng cơ thể. Với liều 150 mg/kg, nồng độ glucose huyết giảm 20,25% và trọng lượng cơ thể giảm 10,77% so với trước điều trị. Với liều 300mg/kg, trọng lượng chuột giảm 18,10% và nồng độ đường huyết giảm 21,81% so với trước điều trị. Kết quả này cho thấy cao chiết nước lá cây Xấu hổ có tiềm năng trong việc phòng ngừa và hỗ trợ
điều trị bệnh đái tháo đường cho con người.
3.1.3. Đánh giá tác dụng chống oxy hóa của d ịch chiết lá cây Xấu hổ theo phương pháp DPPH
Hợp chất DDPH là chất có khả năng tạ o gốc tự do bền vững, tạo dung dịch màu tím (hấp thụ ở bước sóng 517 nm). Các g ốc tự do DPPH bị quét bởi các chất có khả năng chống oxy hóa, dung dịch DDPH s ẽ tạo dung dịch màu vàng. Dựa vào phương pháp đó để đánh giá khả năng quét gốc tự do của cao chiết nước lá cây Xấu hổ. Kết quả được thể hiện trong bảng 3.5 và hình 3.1
Bảng 3.5. Khả năng quét gốc tự do của các mẫu thử Mẫu
Vitamin C (μg/ml) Cao chiết (mg/ml)
. Cao chiết
Hình 3.1. Đồ thị biểu diễn khả năng quét gốc tự do DDPH của acid ascorbic và cao chiết nước lá cây Xấu hổ
Từ bảng 3.6 và hình 3.1, kết quả cho th ấ y cao chiết nước lá cây Xấu hổ khảnăng quét gốc tự do tương đối tốt, có giá trị IC50 là 6,32 mg/ml. Tác dụng chống oxy năng quét gốc tự do tương đối tốt, có giá trị IC50 là 6,32 mg/ml. Tác dụng chống oxy hóa của chứng dương acid ascorbic có IC50 là 4,46 µg/ml. Như vậy, khả năng quét gốc tự do của cao chiết nước phụ thuộc vào nồng độ, tại các nồng độ khác nhau thể hiện khả năng quét gốc tự do rõ rệt. Ở nồng độ cao chiết càng cao, khả năng quét gốc tự do càng lớn: nồng độ cao chiết 1 mg/ml khả năng quét gốc tự do chỉ đạt 12,12 ± 1,3 % nhưng khi tăng nồng độ lên lần lượt 2,5 mg/ml; 4 mg/ml; 5 mg/ml; 10 mg/ml; 15 mg/ml khả năng quét gốc tự do cũng tăng lần lượt là 16,62 ± 1,2%; 23,62 ± 1,8%; 51,66 ± 1,8%; 68,31 ± 1,00%; 87,50 ± 1,5%. Tại nồng độ 20 mg/ml khả năng quét gốc tự do đạt 93,93 ± 2,1%.
3.1.4. Đánh giá tác dụng ức chế enzym α – glucosidase in vitro của dịch chiết lácây Xấu hổ. cây Xấu hổ.
Bảng 3.6. Tác động ức chế alpha-glucosidase của cao nước lá cây Xấu hổ STT Tên mẫu 1 Cao chiết Chất đối chứng Acarbose
Kết quả từ bảng 3.6 cho thấy mẫu cao chiết nước lá cây Xấu hổ có khả năng ức chế enzym α-glucosidase rất tốt so với chất đối chứng acarbose qua IC50 thấp hơn nhiều so với acarbose. Giá trị IC50 = 3,09 ± 0,27µg/ml của cao chiết và chất đối chứng có IC50=147,52 ± 4,17μg/ml . Chất đố i chứng dương acarbose hoạt động ổn định trong thí nghiệm.
3.2. Bàn luận
Streptozotocin (STZ) thuộc nhóm hợp chất glucosamine nitrosorea có khả năng gây độc với tế bào β sản xuất insulin của tuyến tụy ở động vật có vú. Chế độ dinh dưỡng nhiều chất béo k ế t hợp tiêm STZ liều thấp ở động vật làm thí nghiệm thường được dùng làm mô hình để sàng lọc các thuốc hạ đường huyết. Đái tháo đường typ 2 có đặc trưng bởi tăng đường huyết, rối loạn lipid máu, rối loạn chuyển hóa carbohydrat. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi cho thấy cao chiết nước lá Xấu hổ có tác dụng chống oxy hóa, ức chế enzym α-glucosidase và làm hạ glucose huyết và trọng lượng tương đương với thuốc đối chứng gliclazide trên chuột bị đái tháo đường do STZ.
Cơ chế STZ gây độc với tế bào β là do STZ sinh ra các gốc tự do, tấn công vào các t ế bào β. Trong quá trình tăng glucose huyết của cơ thể sản sinh ra nhiều gốc tự do làm suy yếu hệ thống phòng thủ chống oxy hóa nội sinh [38]. Như vậy, một trong những cách để phòng ngừa và giảm các triệu chứng của bệnh đái tháo đường là sử dụng các chất chống oxy hóa. Các chất oxy hóa trong dược liệu có đặc tính quét các gốc tự do là do sự góp mặt của nhóm hydroxyl trong công thức cấu tạo của chúng [17]. Để đánh giá khả năng chống oxy hóa, phương pháp DDPH được sử dụng rộng rãi. Kết quả nghiên cứu này cho thấy tác dụng của cao chiết nước lá cây Xấu hổ phụ thuộc vào nồng độ nghĩa là khi nồng độ chất tăng thì tác dụng quét các
gốc tự do cũng tăng theo. Cao chiết nước lá cây Xấu hổ có khả năng quét gốc t ự do DPPH đáng kể với IC50 là 6,32 mg/ml. Jing Zhang và cộng sự đã nghiên cứu ho ạt động quét gốc DDPH của chiết xuất ethanol của toàn bộ cây, thân, lá và hạt của
Mimosa pudica Linn cho thấy các giá trị IC50 của chiết xuất ethanol như sau: lá > toàn bộ cây > hạt > thân [52]. Tuy nhiên, trong cao chiết với nước, các chất chống oxy hóa chứa hàm lượng thấp nên ta thấy hoạt động chống oxi hóa v ừa phải. Vì vậy, cần thử khả năng chống oxy hóa ở các cao chiết với dung môi phân cực khác.
α-glucosidase là một enzym nằm trong màng tế bào đường ruột, tham gia vào bước cuối cùng của quá trình tiêu hóa. Vì vậy, các chất ức chế enzym này sẽ làm giảm quá trình hấp thu đường từ đường tiêu hóa vào máu. Các chất ức chế enzym α- glucosidase đã được sử dụng làm thuốc điề u trị bệnh đái tháo đường typ 2 như acarbose, miglitol, voglibose [17]. Acarbose là thuốc tân dược dược sử dụng rộng rãi hiện nay và cũng là một chất chứng dương trong các nghiên cứu về tác dụng ức chế enzym α – glucosidase. Trong nghiên cứu này acarbose được sử dụng làm chất chứng dương cho các thí nghiệm đánh giá khả năng ức chế enzyme α-glucosidase. Kết quả của nghiên cứu này cho thấy cao chiết nước có IC50 thấp rất nhiều so với chứng dương, mặc dù dược liệu được chiết bằng dung môi nước chứa nhiều hỗn hợp các chất với nồng độ rất nhỏ, đặc biệt với các chất ít phân cực, cao chiết nước của cây Xấu hổ có IC50(3,09 ± 0,27 μg/ml) thấp hơn gần 47 lần so với IC50 của chất chuẩn (147,52 ± 4,71 μg/ml). Như vậy, cao chiết nước lá cây Xấu hổ rất tiềm năng trong việc tìm các hợp chất trong cao chiết có tiềm năng ức chế enzym α- glucosidase. Vì v ậy, hướng nghiên cứu tiếp theo sẽ tiến hành tách chiết các hợp chất từ cao chiết nước của lá cây Xấu hổ để phân lập các hợp chất có khả năng ức chế enzym này với giá trị IC50 cao.
Kết quả cao chiết nước lá cây Xấu hổ làm hạ glucose huyết của chúng tôi cũng tương đồng với các nghiên cứu trước đây. Deepa Rajendiran và cộng sự đã chứng minh tác dụng dịch chiết ethanol lá cây Xấu hổ có tác dụng làm tăng sinh insulin, gi ảm glucose huyết, giảm HbA1c tăng lượng enzym tổng hợp glucose và giảm phân hủy glucogen [27] . Piyapong Yupparach và cộng sự cũng nghiên cứu cao chiết cồn 80% toàn cây Xấu hổ lên khả năng hạ glucose huyết và lipid máu trên chuột cống. Kết quả cho thấy ở nồng độ 500 mg/kg thể trọng làm giảm đáng kể glucose huyết, nồng độ cholesterol toàn phần triglycerides, lipoprotein tỉ trọng thấp và tăng đáng kể lipoprotein tỉ trọng cao sau 8 tuần điều trị [50].
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT KẾT LUẬN
1.Về xây dựng mô hình đái tháo đường typ 2 thực nghiệm
Để xây dựng mô hình chuột bị đái tháo đường typ 2 thực nghi ệ m, chúng tôi đã tạo mô hình chuột béo phì với chế độ ăn nhiều chất dinh dưỡng và nuôi trong chu kỳ 12 giờ sáng/ tối dưới nhiệt độ kiểm soát 250C ± 30C. Sau 8 tuần chọn các con chuột béo phì có khối lượng từ 35 g trở lên để tiếp tục làm thí nghiệm.
Chuột đủ tiêu chuẩn về khối lượng tiến hành chia lô để gây mô hình đái tháo đường bởi tiêm màng bụng chuột liều thấp streptozotocin (120 mg/kg thể trọng). Bằng phương pháp này, chúng tôi đã gây mô hình đái tháo đường thành công với nồng độ đường huyết của chuột 10,10 ±1,73 mmol/l được chọn làm các thí nghiệm tiếp theo.
2. Về tác dụng của cao chiết lá cây Xấu hổ trong hỗ trợ điều trị bệnh tiểu đường
Chúng tôi đã xác định được tác dụng chống oxy hóa qua phương pháp DPPH của cao chiết nước của lá cây Xấu hổ có IC50 của là 6,32 mg/ml.
Tác dụng ức chế enzym α – glucosidase của cao chiết là 3,09 ± 0,27 μg/ml . Kết quả nghiên cứu còn cho thấy cao chiết nước có tác dụng hỗ trợ điều trị đái tháo đường, có tác d ụng hạ đường huyết và trọng lượng trên chuột béo phì bị gây đái tháo đường với li ề u từ 150 mg/kg thể trọng.
ĐỀ XUẤT
Từ những kết quả thu được trong nghiên cứu chứng minh lá cây Xấu hổ, nhóm nghiên c ứu chúng tôi đề xuất:
- Phân lập các hoạt chất chính từ lá cây Xấu hổ cần được tiến hành để làm rõ hơn về tác dụng và cơ chế của dược liệu này về tác dụng điều trị đái tháo đường.
- Kết quả thu được đã chứng minh lá cây Xấu hổ có thể hỗ trợ trong điều trị bệnh đái tháo đường, vì vậy, tiến hành nghiên cứu bào chế các sản phẩm hỗ trợ điều trị tiểu đường từ lá cây Xấu hổ.
TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT
1. Đàm Trung Bảo và cộng sự (1997), Hội nghịkhoa học Trường Đại học dượckhoa Hà Nội, tr:1974 –1977.
2. Bệnh viện Bạch Mai (2017), “ Đái tháo đường”, Hướng dẫn chẩn đoán vàđiều trị bệnh nội khoa, NXB Y học, tr: 411 -416.
3. Bộ Y tế (2009), “ Đái tháo đường”, Bệnh học, NXB Giáo Dục, tr: 179 – 191.
4. Bộ Y tế (2012), “Hormon và thuốc điều trị rối loạn nội tiết”, Dược lý học tập2,NXB Y học, tr: 303-304.
5. Bộ Y Tế (2017), Hướng dẫn chẩn đoán và điều trị đái tháo đường typ 2.
6. B.m.Y.h.C.t.d – Trường Đại học Y Hà Nội (1999), “Đái tháo đường”, Y họccổ truyền, NXB Y học, tr. 542–543.
7. Võ Văn Chi (1991), Cây thuốc An Giang, tr:358.
8. Võ Văn Chi (1997), Từ điển cây thuốc Việt Nam, tập 2, tr: 587-588.
9. Nguyễn Thị Hương Giang (2015), “Bài tổng quan mối liên hệ giữa béo phì và kháng insulin trong đái tháo đường typ 2”, Nghiên cứu dược Thông tinthuốc, (5), pp: 31-34.
10. Nguyễn Thị Hằng, Nguyễn Thị Thanh Tâm, Mai Hữu Phương (2016), “Khả năng bắt gốc tự do DDPH và năng lực khử của Nam Sâm Bò ở Cần Giờ,
TP.HCM”, Tạp chí khoa học ĐHSP TP.HCM, (12), pp: 112-122.
11. Phạm Hoàng Hộ (2006 ), Cây có vịthuốcở Việt Nam, tập 1, tr:119 - 218.
12. Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, tập 1, tr:819 .
13. Đinh Hải Linh (2012), Nghiên cứu hoạt tính hạ đường huyết và mỡ máu củadịch chiết cây trâm Syzygium spp , Đại học KH- TN.
14. Nguyễn Văn Mùi (2015), Enzym học, NXB ĐHQGHN, tập 1, tr:361.
15. Đỗ Tất Lợi (2004), Những cây thuốc và vịthuốc Việt Nam, tr:794- 796.
16. Bùi Thanh Tùng, Thu NTK, Hải NT (2016), "Tác dụng chống oxy hóa và ức chế enzym acetylcholinesterase của curcuminoid", Tạp chí Dược học, 56(12), tr:08-12.
17. Bùi Thanh Tùng, Thu ĐK, Hải PT, Hải NT. (2018), "Đánh giá tác dụng ức chế enzym α-glucosidase của các phân đoạn dịch chiết quả Lựu
(Punica granatum Linn))", Tạp chí Y Dược cổ truyền Việt Nam, 5(18), tr:59- 63.
18. Viện Dược Liệu (2006), Cây thuốc và Động vật làm thuốcở Việt Nam, tập
TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI
19. A. RK (2015), "Diversity of ethnomedicinal plants in Boridand Forest of District Korea, Chhattisgarh, India", Am J Plant Sci, 6, pp:413–425.
20. Ahmad H, Sehgal S, Mishra A, Gupta R (2012), “Mimosa pudica L. (Laajvanti): An overview”, Pharmacogn Rev, 6 (12), pp:115-24.
21. Akbarzadeh, A., et al (2007), “Induction of diabetes by
Streptozotocin in rats”, Indian Journal of Clinical Biochemistry, 22(2), pp:60- 64.
22. Babu, P.A., et al (2016), “A database of 389 medicinal plants for diabetes”,Bioinformation,1(4), pp: 130.
23. Bansal P, Paul P, Mudgal J, Nayak PG, Pannakal ST, Priyadarsini K,
et al (2012), "Antidiabetic, antihyperlipidemic and antioxidant effects of the flavonoid rich fraction of Pilea microphylla (L.) in high fat diet/streptozotocin-induced diabetes in mice", Experimental and Toxicologic
24. Bashir, R., et al (2013), “Antidiabetic Efficacy of Mimosa pudica (Lajwanti)
Root in Albino Rabbits”, International Journal of Agriculture & Biology,
15(4), pp:782-786.
25. Brand Williams, W., Cuvelier, M. E. & Berset, C. (1995), “Use of free radical method to evaluate antioxidant activity”, LWT, 28, pp:25 – 30.
26. D. D. R. Y. M. M. B. K. M. N. N. P. C. M. C. H.Gadgoli (2009), "Evaluation of wound healing activity of root of Mimosa pudica", Journal of Ethnopharmacology , 124(2), pp. 311-315.
27. Deepa Rajendiran SK, Senthilkumar Sivanesan, Saravanan Radhakrishnan, Krishnamoorthy Gunasekaran (2017), "Potential Antidiabetic Effect of Mimosa pudica Leaves Extract in High Fat Diet and Low Dose Streptozotocin-Induced Type 2 Diabetic Rats", International Journal of Biology Research, 2(4), pp:55-62.
28. Diarra, M., et al (2016), “Medicinal Plants in Type 2 Diabetes: Therapeutic and Economical Aspect”, International Journal of Preventive Medicine, 7, pp:56.
29. Graham, M.L., et al (2011), “The Streptozotocin-Induced Diabetic Nude Mouse Model: Differences between Animals from Different Sources”,
30. Gandhiraja, N., et al (2009), “Phytochemical screening and antimicrobial activity of the plant extracts of Mimosa pudica Linn. Against selected microbes”, Ethnobotanical leaflets, (5), pp:8
31. Haimin Chen, Xiaojun Yan, Wei Lin, Li Zheng, Weiwei Zhang (2004), “A
New Method for Screening a-Glucosidase Inhibitors and Application to Marine Microorganisms”, Pharmaceutical Biology, 42 (6), pp:416 –421.
32. Hakamata W, Kurihara M, Okuda H, Nishio T, Oku T. (2009), “Design and screening strategies for alpha-glucosidase inhibitors based on enzymological information”, Curr. Top. Med. Chem., 9 (1), pp:3-12.
33. J. C. P. N. Sanaye M. M (2015), "Mimosa- A brief overview", Journal ofPharmacognosy and Phytochemistry, 4(2), pp. 182-187.
34. Joby Jose. A. D. K. R. H. T. S. K. S. J. E. J. V. S. S (2016), "Structural characterization of a novel derivative of myricetin from Mimosa pudica as an anti-proliferative agent for the treatment of cancer," Biomedicine &Pharmacotherapy, 84, p. 1067–1077.
35. John H.Karam (1998), “Pancreatic Hormones and Antidiabetes drugs”. Basic and Clincal Pharmarcology, Appleton and Lange, pp:.684– 705.
36. K. K. a. C. C. Ramesh S (2017), "Photochemical screening and
pharmacognostic studies", International Journal of Fauna and Biological Studies, 4(4), pp:170-175.
37. Kim Y. M., Wang M. H., Rhee H. I. (2004), “A novel a-glucosidase inhibitor from pine bark”, Carbohydr. Res., 339, pp:715–717.
38. Lenzen S. (2008), "The mechanisms of alloxan-and streptozotocin- induced diabetes", Diabetologia, 51(2), pp: 216-226.