3. Bacillus thuringiensis và thuốc trừ sõu sinh học Bt
2.2.8.1. Đỏnh giỏ loại bựn thải thớch hợp làm mụi trường nuụi cấy B.thuringiensis
thuringiensis:
Mỗi loại bựn thải cú tỷ lệ cỏc chất dinh dưỡng khỏc nhau, nờn ta cần tiến hành thớ nghiệm để tỡm loại bựn thớch hợp nhất làm nguyờn liệu nuụi cấy Bacillus thuringiensis. Thớ nghiệm được tiến hành như sau:
-TN1: sử dụng mụi trường MPB làm đối chứng(ĐC); -TN2: 10% bựn ở bểđiều hoà; -TN3: 10% bựn ở bể lắng; -TN4: 10% bựn ởđầu vào bể Aeroten; -TN5: 5% bựn sau ộp; -TN6: 20% bựn ở bể Aeroten;
Cỏc mẫu bựn pha loóng được điều chỉnh về pH = 7 rồi đem khử trựng tất cả cỏc mẫu ở nhiệt độ 121oC trong 15 phỳt.
Sau khi khử trựng, cỏc mẫu thớ nghiệm đuợc cấy giống theo tỷ lệ 1% thể tớch rồi
được nuụi cấy lắc 200 vũng/phỳt ở 30oC.
Tiến hành lấy mẫu phõn tớch ở cỏc thời điểm 0 giờ, 24 giờ và 48 giờ để xỏc định số lượng tế bào vi khuẩn B.thuringiensis và đỏnh giỏ kết quả thu được.
2.2.8.2. Nghiờn cứu ảnh hưởng của phương phỏp tiền xử lý đến khả năng sinh trưởng và hỡnh thành bào tử của B.thuringiensis:
Trước khi sử dụng làm nguyờn liệu nuụi cấy vi sinh vật, cỏc mẫu bựn đuợc tiến hành tiền xử lý theo cỏc phương phỏp thuỷ phõn kết hợp với axit hoỏ hay kiềm hoỏ như sau:
-TN1: sử dụng mụi trường MPB làm mẫu đối chứng (ĐC) -TN2: Bựn thải đuợc điều chỉnh về pH = 2;
-TN3: Bựn thải đuợc điều chỉnh về pH = 7; -TN4: Bựn thải đuợc điều chỉnh đến pH = 9;
Cỏc mẫu bựn thải sau khi điều chỉnh về cỏc pH axit, trung tớnh và kiềm thỡ được thuỷ phõn ở điều kiện 121oC trong 15 phỳt. Sau đú, điều chỉnh lại pH của cỏc mẫu này và đem khử trựng tất cả cỏc mẫu ở 121oC trong 15 phỳt.
Sau khi tiến hành tiền xử lý, cỏc mẫu được bổ sung giống theo tỷ lệ 1% thể tớch,
đưa nuụi lắc 200v/p ở 30oC và tiến hành lấy mẫu kiểm tra tại cỏc thời điểm 0h, 12h, 24h, 36h và 48h.