- Chúng tôi ñã chọn và thử nghiệm ñ iều trị 45 con nái bị viêm tử cung với các phác ñồ trên, mỗi phác ñồñiều trị thử nghiệm với 15 con.
3.5.4. Phương pháp xác ñịnh vi khuẩn từ dịch tử cung của lợn mắc hội chứng MMA
chứng MMA
3.5.4.1.Lấy mẫu dịch tử cung của lợn bình thường sau khi ựẻ và lợn bị viêm tử cung.
* Cách lấy mẫu dịch tử cung lợn xét nghiệm
- Lấy mẫu dịch tử cung, âm ựạo của lợn nái bình thường sau ựẻ 12 -
24 giờ và lợn bị viêm tử cung, âm ựạo. Phân lập giám ựịnh thành phần, số
lượng vi khuẩn trên các môi trường chuyên dụng theo phương pháp vi sinh vật thường quy.
- Làm kháng sinh ựồ theo phương pháp của Kirby - Bauer (1996) - Giấy tẩm kháng sinh do hãng Oxoid (Anh) sản xuất.
- đánh giá kết quả dựa theo tiêu chuẩn quốc tế 1996 (antibiotic susceptibility testing 1996)
+ Với lợn ựẻ: dùng mỏ vịt (ựã ựược sát trùng) ựể mở âm ựạo sau ựó lấy thìa sản khoa thu dịch tử cung cho vào ống nghiệm ựã ựược vô trùng, mỗi lần lấy khoảng 3 - 5 ml.
+ Với lợn bị viêm, dùng mỏ vịt (ựã ựược sát trùng) mở âm ựạo, sau ựó lấy thìa sản khoa thu dịch tử cung cho vào ống nghiệm ựã ựược vô trùng, mỗi lần lấy khoảng 3 - 5 ml.
* Bảo quản và sử lý mẫu
- Các mẫu dịch ựể kiểm tra sau khi lấy ựược giữ trong tủ lạnh ở nhiệt
ựộ 2-80C trong vòng 24 giờ, ựưa ựến phòng thắ nghiệm ựã ựược vô trùng và tiến hành kiểm tra theo phương pháp nghiên cứu vi khuẩn học.
3.5.4.2 Phương pháp xác ựịnh các loại vi khuẩn
- Các ựĩa thạch thường sau khi ựã ria cấy vi khuẩn, bồi dưỡng trong tủ ấm 370C/24 giờ, lấy ra quan sát hình thái, kắch thước và dạng khuẩn lạc. Từ ựó ựịnh ựược các loại vi khuẩn.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ 40
- Mỗi loại vi khuẩn, khi mọc trên môi trường cố thể sẽ hình thành một loại khuẩn lạc có kắch thước, hình dáng và màu sắc riêng biệt như:
+ Staphylococcus: khuẩn lạc dạng S, rìa gọn, tròn, mặt lõm lồi, láng bóng, có màu vàng rơm (nếu là Staphylococcus aureus).
+ Streptococcus: khuẩn lạc dạng S, nhỏ mầu hơi xám, bóng.
+ Salmonella: Khuẩn lạc dạng S, có thể có khuẩn lạc dạng R, khuẩn lạc tròn, ớt, không trong suốt, màu tro, trắng nhạt, hơi lồi. Theo Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (1997), Nguyễn Như Thanh (2006).
3.5.4..3 Xác ựịnh ựộ mẫn cảm của các chủng vi khuẩn phân lập ựược từ dịch tử cung lợn bằng phương pháp kháng sinh ựồ.
- Tiến hành làm kháng sinh ựồ theo phương pháp khuyếch tán trên thạch của của Kirby - bauer.
- Phương pháp chỉ dùng canh trùng nuôi cấy vi khuẩn ở 370C trong 24 giờ, ria cấy trên mặt thạch. để ựĩa thạch từ 3 ựến 5 phút cho khô, nhưng không qúa 25 phút. Sau ựó dùng pank vô trùng ựặt các mảnh giấy kháng sinh tiếp xúc với mặt thạch. Các mảnh giấy kháng sinh ựặt cách nhau dưới 24mm.
- Sau khi ựặt các mảnh giấy vào ựĩa thạch ựược khoảng 15 phút, ựặt ựĩa thạch vào tủ ấm 370C, sau 16 - 18 giờ lấy ra ựọc kết quả. Kết quả ựược ựọc bằng cách dùng thước mm ựểựo ựường kắnh của vòng vô khuẩn, ựo phắa sau mặt ựĩa thạch. Nếu cạnh của vòng ức chế không rõ nét thì phải ựo chỗ hẹp nhất và chỗ rộng nhất rồi lấy giá trị trung bình. đường kắnh của vòng vô khuẩn ựược tắnh ra mm. Nếu khuẩn lạc mọc trong vòng ức chế rõ rang thì phải nuôi cấy, phân lập và thử lại. - Kết quả kháng sinh ựồ chỉựược ứng dụng
ựiều trị với vi khuẩn còn mẫn cảm với thuốc kháng sinh, còn khi vi khuẩn ựã kháng thuốc tức vòng vô khuẩn dưới mức diệt khuẩn thì không ựược dùng.
- Khi vi khuẩn ở mức rất mẫn cảm chúng ta sử dụng thuốc ở liều ựiều trị trung bình. Khi vi khuẩn mẫn cảm ở mức trung bình thì thuốc ựiều trị ựã
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ 41
chọn phải dùng ở liều cao hơn, hoặc bơm thẳng vào vị trắ ựang bị bệnh trong cơ thể (bơm vào tử cung).
- Vi khuẩn kháng thuốc, tuyệt ựối không ựược dùng ựểựiều trị bệnh.
3.5.4..4. Phương pháp xác ựịnh các chỉ tiêu
* để xác ựịnh một số chỉ tiêu lâm sàng như: Thân nhiệt, màu sắc dịch viêm, mức ựộ thu nhận thức ăn chúng tôi ựã sử dụng những phương pháp thường quy ựếm nhiều lần hoặc quan sát vào một thời ựiểm quy ựịnh và lấy số
bình quân.
+Thân nhiệt: Dùng nhiệt kế thuỷ ngân ựểựo trực tràng lợn, một ngày
ựo 2 lần: Sáng: 7 - 9h; Chiều: 16 -18h. 3.6. Phương pháp sử lý số liệu
Toàn bộ số liệu ựều ựược theo dõi, ghi chép và xử lý theo phương pháp thống kê sinh vật học trên máy tắnh bằng chương trình Microsoft Excel.
Tổng số con mắc bệnh
+ Tỷ lệ lợn mắc bệnh (%) = ừ100
Tổng số con theo dõi
Tổng số con mắc bệnh lặp lại + Tỷ lệ mắc lặp lại (%) = ừ100 Tổng số con ựã khỏi bệnh Tổng số con phối lần ựầu có chửa + Tỷ lệ lợn phối lần ựầu có chửa (%) = ừ100 Tổng số con khỏi bệnh
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ 42