Sử dụng các dụng cụ chuẩn để đo lường các chỉ số nhân trắc (WHO, 2002) thu thập các biến số: cân nă âng, chiều cao, chỉ số BMI, đo huyết áp.
- Cân đối tượng: Sử dụng cân SECA (độ chính xác 0,01 kg). Cân đối tượng vào buổi sáng khi chưa ăn uống gì và đã đi đại tiểu tiện. Cân được đặt ở vị trí ổn định và bằng phẳng. Khi cân chỉ mặc quần áo gọn nhất và trừ bớt cân nặng trung bình của quần áo khi tính kết quả. Đối tượng đứng giữa bàn cân, không cử động, mắt nhìn thẳng, trọng lượng phân bố đều ở 2 chân. Trọng lượng cơ thể được ghi theo kg với 1 số lẻ.
- Đo chiều cao: đứng bằng thước gỗ có độ chia chính xác tới milimét. Đối tượng bỏ guốc dép, đi chân không, đứng quay lưng vào thước đo. Gót chân, mông, vai, đầu theo 1 đường thẳng áp sát vào thước đo đứng, mắt nhìn thẳng theo 1 đường thẳng nằm ngang. Hai tay bỏ thõng theo hai bên mình. Kéo cái chặn đầu của thước từ trên xuống, khi áp sát đến đỉnh đầu nhìn vào thước đọc kết quả. Chiều cao được ghi theo cm và 1 số lẻ.
- Đo huyết áp: Dụng cụ sử dụng là huyết áp kế thủy ngân. Đối tượng
được đo huyết áp 2 lần cách nhau 2 phút. Kết quả được ghi theo đơn vị mmHg. Số đo huyết áp của đối tượng sẽ được tính là kết quả trung bình của 2 lần đo. Nếu kết quả huyết áp giữa 2 lần đo chênh lệch nhau > 10 mmHg thì phải đo lại lần thứ 3.
-Quy trình lấy máu: Lấy 2 ml máu tĩnh mạch vào buổi sáng, khi đói (đối tượng nhịn đói ít nhất là 10 tiếng trước khi lấy máu nhưng không quá 16 tiếng). Đối tượng được nghỉ ngơi tối thiểu 10 phút trước khi tiến hành lấy máu. Loại trừ những người đang bị sốt hoặc nếu không đồng ý cho lấy máu. Cho máu vào ống nghiệm chứa sẵn heparin chuyên dùng cho xét nghiệm sinh hóa máu. Bệnh phẩm sau đó được phân tích ngay sau khi về đến khoa Sinh hóa, tiến hành làm xét nghiệm. Sau đó bảo quản bệnh phẩm trong điều kiện lạnh từ 20C đến 80C lưu trữ trong 3 ngày.
- Trung tâm xét nghiệm: Khoa Sinh hóa - Bệnh viện Trung ương Quân đội 108 tiến hành định lượng TC, TG, HDL - C, LDL - C, glucose huyết thanh và nồng độ HbA1C.
- Trang thiết bị phân tích mẫu máu: Máy phân tích tự động Beckman Coulter 5800 tốc độ 2000tests/h; máy Beckman Coulter 2700 tốc độ 1600tests/h, máy ly tâm tốc độ tối đa 10.000 vòng/phút (Mỹ).
- Hóa chất nghiên cứu: Kit xác định nồng độ cholesterol, triglycerid, HDL - C, LDL - C, glucose của hãng BioSystems (Tây Ban Nha).
- Phương pháp phân tích như sau:
+ Định lượng triglycerid huyết thanh theo phương pháp GPO-PAP: Phương pháp so màu dùng enzym (glycerol phosphat oxidase phenazon amino oxidase).
Nguyên tắc: Triglycerid trong huyết tương bị thủy phân bởi lipase vi khuẩn, tạo thành glycerol và acid béo. Với sự có mặt của ATP và enzym glycerolkinase, glycerol bị phosphoryl hóa thành glycerol-3-phosphate. Glycerol-3-phosphate sau đó lại bị oxy hóa thành H2O2 và dihydroxy aceton phosphate dưới tác dụng của glycerol phosphate oxydase. H2O2 được sử dụng trong phản ứng liên kết giữa –chlorophenol và 4-aminoantinpyrine với sự xúc tác của enzym peroxidase tạo thành quinonemine có màu đỏ. Đậm độ màu
hồng tím tỷ lệ thuận với nồng độ triglycerid có trong huyết thanh, được xác định ở bước sóng 546 nm bằng phép đo điểm cuối.
Triglycerid + 3 H2O Lipase Glycerol+ 3 Acid béo
Glycerol + ATP Glycerolkinase Glycerol 3 phosphate + ADP Glycerol (3P) + O2 Oxidase Dihydroxy aceton P + H2O2. H2O2+4 Aminoantipyrine+4-Chlorophenol Peroxidase Quinonemine+ 4 H2O.
Nồng độ triglycerid được tính theo đơn vị mmol/L. Giá trị bình thường trong khoảng 0,46-1,88 mmol/L. Khi triglycerid máu > 2,3 mmol/L được gọi là tăng.
+ Glucose máu được định lượng theo phương pháp GOD-PAP: Enzyme đo màu thử nghiệm trên cơ sở phản ứng Trinder:
Glucose trong huyết thanh được xác định theo phản ứng sau:
Glucose+ ½ O2 + H2O Acid gluconic + H2O2. (GOD: Glucose oxidase).
2 H2O2 + Phenol + 4 Aminoantipyrine POD Quinonemine+ 4H2O (Peroxidase)
Đậm độ mẫu của phức hợp tạo thành tỷ lệ thuận với nồng độ glucose trong huyết thanh và được xác định ở bước sóng 505 nm.
Giá trị bình thường lúc đói 3,9 – 6,4 mmol/L.
+ HDL - C huyết thanh định lượng bằng phương pháp enzym so màu dựa trên nguyên tắc sau:
Kháng thể kháng β-lipoprotein của người trong thuốc thử R1 gắn với các lipoprotein không phải HDL (LDL, VLDL, chylomicrons). Phức hợp miễn dịch tạo thành sẽ cản trở các phản ứng enzym của các lipoprotein này khi thuốc thử R2 được thêm vào. HDL-C được định lượng bởi sự có mặt của một hệ thống enzym tạo màu (enzym chromogen system). Nồng độ HDL-C có trong bệnh phẩm tỷ lệ với sự tăng độ hấp thụ của blue dye ở bước sóng 600 nm.
Giá trị bình thường > 0,9 mmol/L. + Định lượng LDL - C huyết thanh:
Định lượng trực tiếp LDL - C bằng thuốc thử của hãng BioSystems (Tây Ban Nha).
Phương pháp qua 2 bước: Đầu tiên chylomicron, VLDL-C và HDL-C bị loại ra bởi phản ứng enzym đặc hiệu. Sau đó LDL-C còn lại sẽ được phát hiện bởi phản ứng enzym, phản ứng đặc hiệu cho LDL-C.
+ LDL - C cũng có thể được tính theo công thức của Fridewald (công thức nội suy) như sau:
LDL-C = Cholesterol TP – (HDL-C + 0,45 triglycerid). Giá trị bình thường ≤ 3,38 mmol/L.
+ Định lượng Cholesterol toàn phần huyết thanh theo phương pháp CHOD-PAP: Phương pháp so màu dùng enzym (enzymatic colorometric), cholesterol oxidase phenazon amino peroxidase.
+ TC huyết tương được định lượng bằng phương pháp enzym so màu dựa trên nguyên tắc: Cholesterol ester trong bệnh phẩm được thủy phân bởi enzym cholesterol esterase (CHE). Cholesterol tự do tạo thành bị oxy hóa thành cholesterne-3-one và hydro peroxid (H2O2) dưới xúc tác của enzym Cholesterol oxidase (CHO). H2O2 liên kết oxy hóa (oxidatively couples) với 4-aminoantipyrin và phenol với sự hiện diện của enzym peroxidase (POD) tạo thành quinoneimine có màu đỏ. Nồng độ cholesterol có trong bệnh phẩm tỷ lệ với sự tăng độ hấp thụ của quinoneimine ở bước sóng 546 nm.
Cholesterol este + H2O cholesterol tự do + Acid béo. Cholesterol tự do + O2 Cholesterol oxidase Cholesten-4 + H2O2.
2 H2O2 + 4-Aminoantipyrine +Phenol Peroxidase Quinonemine + 4H2O. .Giá trị bình thường < 5,2 mmol/L.
Cholesterol esterase
* Phương pháp đánh giá, nhận định:
- Đánh giá tình trạng dinh dưỡng người trưởng thành theo khuyến cáo của WHO (2000)
BMI ≥ 40: Béo phì độ III BMI: 35 - 40: Béo phì độ II BMI: 30 – 34,9: Béo phì độ I BMI: 25– 29,9: Tiền béo phì BMI ≥ 25: Thừa cân BMI 18,5 – 24,9: Bình thường
BMI < 18,5: Thiếu năng lượng trường diễn (CED).
- Đánh giá tình trạng tăng huyết áp dựa theo phân loại của ESH & ESC – JNC 7 năm 2003:
Phân loại tăng huyết áp HA tối đa (mmHg) HA tối thiểu (mmHg)
Huyết áp tối ưu < 120 < 80
Huyết áp bình thường 120 – 129 80 – 84
Huyết áp bình thường cao 130 – 139 85 – 89
Tăng huyết áp độ 1 (Nhẹ) 140 – 159 90 – 99
Tăng huyết áp độ 2 (Vừa) 160 – 179 100 – 109
Tăng huyết áp độ 3 (Nặng) ≥ 180 ≥ 110
- Rối loạn lipid máu theo NCEP ATP III: [25]
Cholesterol huyết thanh TP ≥ 5,2 mmol/L (200mg/dL) hoặc HDL–C huyết thanh < 0,9 mmol/L (35mg/dL) hoặc LDL–C huyết thanh > 3,38 mmol/L (130mg/dL) hoặc triglycerides huyết thanh > 2,26 mmol/L (200mg/dL).
- Glucose máu: Tiêu chuẩn chẩn đoán đái tháo đường, tiền đái tháo đường do Hiê âp hô âi Đái tháo đường Hoa Kỳ kiến nghị vào năm 1997, nhóm chuyên gia về bê ânh Đái tháo đường của WHO công nhâ ân năm 1998, tuyên bố áp dụng năm 1999, có những tiêu chí sau (không làm nghiê âm pháp dung nạp glucose bằng đường uống):
+ Rối loạn dung nạp glucose: 5,6 - ≤ 6,9 mmol/L + Đái tháo đường: ≥ 7 mmol/L
- Xác định hội chứng rối loạn chuyển hoá: trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng tiêu chuẩn của chương trình giáo dục cholesterol quốc gia Mỹ, kênh điều trị cho người trưởng thành (NCEP ATP III – National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel III), hội chứng chuyển hoá được xác định khi có từ 3 dấu hiệu trở lên trong 4 dấu hiệu sau:
+ Triglycerid cao ≥ 1,7 mmol/L
+ HDL-C thấp (< 1mmol/L đối với nam; < 1,3 mmol/L đối với nữ) + Huyết áp: khi HATT ≥ 140 mmHg hoặc HATTr ≥ 90 mmHg. + Glucose máu khi đói cao: glucose máu > 6,1 mmol/L.