C 12H22O11 + H2 O4 H3HOHOOH Lactose Acid lactic
4. Tính kết quả:
Đối với mẫu rắn:
Đối với mẫu lỏng:
Trong đó:
- A: số ml NaOH 0,1N dung chuẩn độ (lấy kết quả trung bình của 3 lần chuẩn độ liên tiếp).
- f: hệ số pha loãng. - P: khối lượng mẫu (g). - V: số ml mẫu (ml).
- K: hệ số biểu thị số gam acid tương đương với 1ml dung dịch NaOH 0,1 N phụ thuộc vào loại thực phẩm và nồng độ dung dịch kiềm.
Ghi chú: Tùy loại thực phẩm quy về từng acid đặc trưng của thực phẩm đó để tính. Nếu là sữa quy về acid lactic (CH3CHOHCOOH) K=0,009.
Phụ lục 10: Phương pháp xác định hàm lượng đạm tổng số bằng phương pháp Kjeldahl.
1. Nguyên lý
Vô cơ hóa thực phẩm bằng H2SO4 đậm đặc có xúc tác đặc biệt (K2SO4, CuSO4) rồi dùng kiềm đặc mạnh: NaOH đẩy NH3 từ muối (NH4)2SO4 ra thể tự do. NH3 được hấp thụ bởi H2SO4 tiêu chuẩn. Sau đó định lượng H2SO4 tiêu chuẩn dư bằng NaOH tiêu chuẩn.
Các phản ứng xảy ra:
R-CH-COOH + H2SO4 CO2 + SO2+ H2O+ (NH4)2SO4
2NaOH + (NH4)2SO4 = Na2SO4 + NH3 + H2O 2NH3 + H2SO4 tiêu chuẩn = (NH4)2SO4
2NAOHtiêu chuẩn + H2SO4 tiêu chuẩn/dư = Na2SO4 + H2O
2. Tiến hành:
Bước 1: Vô cơ hóa mẫu
Lấy chính xác 1g mẫu cho vào bình Kjeldahl, thêm 2g hỗn hợp chất xúc tác K2SO4 và CuSO4 + 10ml H2SO4 đậm đặc. đặt nghieng bình Kjeldahl 1 góc 45o trên bếp điện trong tủ Host và tiến hành vô cơ, trong khi vô cơ màu sắc chuyển từ màu nâu đen sang vàng rồi xanh trong hoặc không màu là được. Sau khi vô cơ xong, để nguội mẫu.
Chú ý: - Trong quá trình vô cơ nếu mẫu chưa đạt đến màu xanh trong mà
dung dịch bị cạn thì lấy bình ra để nguội và them vào 5ml dung dịch H2SO4 đậm đặc rồi tiếp tục vô cơ.
Xúc tác Nhiệt độ
- Khi vô cơ hóa mẫu, tránh hiện tượng sôi quá mạnh làm bắn ra ngoài gây sai số, phải vô cơ triệt để hoàn toàn.
- Trong khi vô cơ hóa mẫu thì tiến hành sục rửa thiết bị chưng cất đạm, kiểm tra độ kín. Yêu cầu thiết bị phải sạch và kín.
Bước 2: Sục rửa thiết bị, kiểm tra độ kín của thiết bị Bước 3: Chuẩn bị cốc hứng
Lấy cốc thủy tinh 250ml sạch cho vào cốc 20ml H2SO4 0,1N và vài giọt metyl đỏ 0,1 %. Đặt cốc dưới đầu ống sinh hàn của thiết bị chưng cất đạm. Đầu ống sinh hàn phải ngập vào dung dịch trong cốc.
Bước 4: Chưng cất.
Sau khi vô cơ hóa mẫu xong, để nguội rồi đổ từ từ dung dịch trong bình Kjeldahl vào bình chưng cất, dùng nước cất tráng lại bình vài lần, nước tráng cũng chuyển vào bình chưng cất, cho vài giọt phenolphtalein 1% vào bình chưng cất. Thêm từ từ dung dịch NaOH 30% vào bình chưng cất cho đến khi dung dịch trong bình có màu đỏ hay tím đỏ là được. Dùng nước cất tráng đường ống dẫn vào bình chưng cất.
Lắp kín thiết bị, cho nước chảy vào ống sinh hàn rồi bắt đầu chưng cất, chưng cất khoảng 20 phút kể từ khi dung dịch bắt đầu sôi, sau đó tiến hành thử để xác định xem mẫu thử đã hết đạm chưa. Cách thử như sau: nâng đầu ống sinh hàn lên khỏi cốc hứng (cốc hứng vẫn đạt ở đầu ống sinh hàn). Dùng bình tia rửa xung quanh và trong ống sinh hàn. Nước rửa tiếp tục được hứng vào cốc hứng. chưng cất khoảng 1÷2 phút, dung giấy quỳ hoặc giấy đo pH để thử: nếu pH = 7 thì quá trình chưng cất kết thúc. Nếu pH > 7 thì tiếp tục chưng cất.
Bước 5: Chuẩn độ
Lấy cốc hứng đem chuẩn độ bằng NaOH 0,1N cho đến khi có màu vàng thì dừng lại. Đọc thể tích NaOH tiêu tốn.