Việc nghiên cứu khả năng bảo quản của enzyme sau khi tinh sạch đóng vai trò quan trọng cho các bước tinh sạch cao hơn và sử dụng tiếp theo. Giống như các enzyme khác, enzyme cellulase cũng dễ bị mất hoạt tính khi bảo quản ở nhệt độ thường nên việc bảo quản các loại enzyme thường tiến hành ở nhiệt độ thấp.
Các mẫu enzyme sau khi kết tủa, cân khối lượng sẽ được cho vào bảo quản ở nhiệt
độ -20oC và được đo hoạt tính sau mỗi 7 ngày. Kết quả khảo sát được trình bày ở
bảng 5.
Bảng 5: Sự thay đổi hoạt tính enzyme cellulase đã tinh sạch sơ bộ bằng phương pháp kết tủa với ammonium sulfate theo thời gian bảo quản
Điều kiện bảo quản Thời gian bảo quản (tuần) Hoạt tính riêng (U/mg protein) 0 0,065d 1 0,060cd Lạnh đông (-200C) 2 0,055bc 3 0,052ab 4 0,046a
Các chữ cái khác nhau trong cùng một cột biểu thị sự khác biệt có ý nghĩa với độ tin cậy 95%
Từ bảng kết quả tổng hợp trên, cho thấy hoạt tính riêng của enzyme cellulase sau khi tinh sạch sơ bộ bằng muối ammonium sulfate giảm dần theo thời gian bảo quản
ởđiều kiện lạnh đông (nhiệt độ -20oC), tuy nhiên sự giảm hoạt tính riêng này không nhiều. Tuần đầu tiên, hoạt tính riêng đo được là 0,065 U/mgprotein thì đến tuần thứ 4 hoạt tính giảm còn 0,046 U/mgprotein (giảm khoảng 1,4 lần). Nhiệt độ lạnh đông thường được chọn để bảo quản enzyme vì lượng nước tự do trong hỗn hợp kết tủa giảm kéo theo độ hoạt động của nước giảm nên hầu hết các các phản ứng hóa học, sinh hóa sẽ bị kìm hãm. Tuy nhiên, điều kiện lạnh đông chỉ có thể kìm hãm một số
phản ứng sinh hóa hay các yếu tố ảnh hưởng khác nhưng không ngăn chặn được hoàn toàn nên hoạt tính của enzyme giảm dần trong các tuần bảo quản tiếp theo.
4.4.2 Sự thay đổi hoạt tính enzyme cellulase đã tinh sạch sơ bộ bằng phương pháp kết tủa với ethanol theo thời gian bảo quản kết tủa với ethanol theo thời gian bảo quản
Kết quả khảo sát sự thay đổi hoạt tính của enzyme cellulase sau khi được tinh sạch sơ bộ bằng ethanol được trình bày ở bảng 6.
Ngành Công nghệ thực phẩm Trang 24
Bảng 6: Sự thay đổi hoạt tính enzyme cellulase đã tinh sạch sơ bộ bằng phương pháp kết tủa với ethanol theo thời gian bảo quản
Điều kiện bảo quản Thời gian bảo quản (tuần) Hoạt tính riêng (U/mg protein) 0 0,070b 1 0,066ab Lạnh đông (-200C) 2 0,061ab 3 0,060ab 4 0,055a
Các chữ cái khác nhau trong cùng một cột biểu thị sự khác biệt có ý nghĩa với độ tin cậy 95%
Ở trường hợp này, hoạt tính riêng có giảm nhưng không đáng kể. Sau 4 tuần bảo quản hoạt tính riêng giảm từ 0,070 U/mgprotein xuống 0,055 U/mgprotein (giảm khoảng 1,27 lần).
So với trường hợp bảo quản lạnh đông enzyme cellulase sau khi tinh sạch sơ bộ
bằng (NH4)2SO4 thì trường hợp bảo quản lạnh đông enzyme cellulase sau khi tinh sạch sơ bộ bằng ethanol có hoạt tính riêng thay đổi ít hơn. Nhưng sự thay đổi này là không đáng kể, từ tuần đầu tiên đến tuần thứ 3 sau khi bảo quản, sự thay đổi không có ý nghĩa về mặt thống kê, đến tuần thứ tư, hoạt tính enzyme giảm có sự khác biệt so với tuần đầu tiên.
Như vậy, khi so sánh khả năng tinh sạch sơ bộ enzyme cellulase thô, enzyme thu
được bằng phương pháp kết tủa với dung môi ethanol lạnh cho hoạt tính riêng cao hơn; đồng thời enzyme giảm hoạt tính ít hơn so với cellulase thu được bằng kết tủa với muối ammonium sulfate.
Ngành Công nghệ thực phẩm Trang 25
CHƯƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ