NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.2. Phương pháp xác định chỉ số ELD50 (liều gây chết 50% phôi) của chủng virus viêm gan vịt nhược độc DH EG
virus viêm gan vịt nhược độc DH - EG - 2000
Mỗi lần cấy truyền dùng 30 phôi, tiêm huyễn dịch virus đã pha loãng theo cơ số 10 vào xoang niệu mô. Trong mỗi lần cấy truyền sử dụng 5 phôi làm đối chứng, không tiêm virus. Ấp tiếp vào tủấm 370C. Sau các khoảng thời gian 24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, 96 giờ kiểm tra xem phôi còn sống hay chết. Nếu phôi chết, cho vào tủ lạnh 40C trong 12 giờ rồi mổ trứng, thu nước trứng và kiểm tra bệnh tích của phôi.
2.4.2. Phương pháp xác định chỉ số ELD50 (liều gây chết 50% phôi) của chủng virus viêm gan vịt nhược độc DH - EG - 2000 chủng virus viêm gan vịt nhược độc DH - EG - 2000
- Chuẩn bị phôi gà: Phôi gà 11 ngày tuổi khỏe mạnh lấy từ đàn gà bố mẹ sạch bệnh, đánh dấu buồng hơi, đánh dấu vị trí đầu phôi.
- Chuẩn bị virus: chủng virus viêm gan vịt nhược độc DH - EG - 2000 được pha với nước sinh lý theo cơ số 10. Xử lý kháng sinh để diệt tạp khuẩn.
- Cách tiến hành (tiến hành trong buồng cấy vô trùng): sát trùng toàn bộ vỏ trứng, các khay trứng thí nghiệm và buồng hơi. Dùng dùi đục trứng dùi một lỗ nhỏ ở đỉnh buồng hơi. Mỗi nồng độ tiêm cho 5 phôi, liều tiêm 0,2 ml/phôi; vị trí tiêm xoang niệu mô. Hàn lỗ tiêm bằng parafin. Cho trứng vào tủấp tiếp ở 370C.
Riêng 5 phôi đối chứng không tiêm virus.
- Theo dõi: Cứ 24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, 96 giờ sau khi tiêm kiểm tra xem phôi còn sống hay đã chết, loại bỏ những phôi chết trước 24 giờ. Lấy các phôi chết cho vào tủ lạnh ở nhiệt độ 40C trong 12 - 24 giờđể mạch máu co lại tránh
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 25 xuất huyết rồi mổ trứng thu nước trứng và kiểm tra bệnh tích của phôi.
- Mổ trứng: sau 96 giờ đem mổ tất cả trứng ở lô thí nghiệm và lô đối chứng để quan sát bệnh tích của phôi.
- Ghi số phôi chết có bệnh tích và số phôi sống ở mỗi độ pha loãng. Tính tỷ lệ phôi chết theo công thức:
Tỷ lệ phôi chết (%) = Tổng số phôi chTổng sết + Tố phôi chổng sếốt phôi sống × 100 - Tính toán liều gây chết tối thiểu 50% phôi (ELD50) theo công thức của Reed-Muench. LgELD50 = LgA + Xlgf X = A'-50 A'-B' Trong đó: X: Khoảng cách tỷ lệ
A: Độ pha loãng virus gây chết phôi cận trên 50% A': Tỷ lệ % chết phôi cận trên 50%
B': Tỷ lệ % chết phôi cận dưới 50% f: Bậc pha loãng virus (10-1)
- Tiến hành 5 đợt thí nghiệm như trên, tính chỉ số ELD50 trung bình.