VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP
2.2.2.Phương pháp thu phôi:
Giết chuột bằng cách kéo dãn dây sống.
Nhúng toàn bộ cơ thể chuột vào cồn.
Đặt chuột nằm ngửa và sát trùng bằng cồn 70o.
Mổ bụng chuột để lộ nội quan.
Dùng kẹp và kéo tháo ruột ra ngoài, định vị 2 nhánh tử cung.
Dùng kẹp gắp tử cung lên và loại bỏ mở bám bên ngoài tử cung.
Cắt lấy toàn bộ tử cung có chứa phôi cho vào đĩa Petri nhựa có chứa sẵn môi trường PBS.
Chuyển tử cung chứa phôi lần lượt sang 2 đĩa Petri môi trường PBS khác để rửa sạch máu .
Dùng kẹp và kéo loại bỏ sạch phần mỡ còn lại dính ngoài tử cung.
Cắt dọc tử cung để lộ phôi ra ngoài và chuyển các phôi sang một đĩa Petri khác chứa PBS. Lúc này phôi vẫn còn trong noãn hoàng.
Dùng 2 kim 26G để giữ xé rách một phần bao noãn hoàng quanh phôi. Thao tác nhẹ nhàng và cẩn thận tránh để phôi bị kim đâm thủng.
Dùng kẹp ấn mạnh bên phần bao noãn hoàng không bị rách để đẩy phôi ra ngoài.
Chuyển phôi vừa thu được sang đĩa Petri PBS mới.
Sử dụng hệ thống vi thao tác, quan sát và cắt phôi làm đôi tại vị trí nách chi trước. Loại bỏ phần đầu của phôi, chuyển phần sau của phôi sang đĩa Petri PBS khác.
Hình 2.3 : Qui trình thu nhận phôi chuột
(a) Chuột sau khi giết bằng ete, (b) Vị trí mổ chuột (c) Phôi chuột, (d) Chùm phôi trong tử cung.
Chú ý: Lúc chuyển phôi qua các môi trường vì phôi nhỏ nên có thể dùng micropipette để hút chuyển phôi qua lại, cần thao tác cẩn thận tránh vỡ phôi.