a. Nguyên lí
Ở nhiệt đô cao dưới tác dụng tác dụng của H2SO4 đậm đặc và có chất xúc tác, các hợp chất hữu cơ bị oxy hóa, carbon và hydro tạo thành CO2 và ốc amin th ị oxy hóa v ải phóng ra NH , sau đó nó tác dụng
Chỉ tiêu Hệ số quan trọng trên tổng điểm bằng 3
Cấu trúc 1,2
Mùi 0,9
với H2SO4 tạo thành (NH4)2SO4 tan trong dung dịch. Đây là giai đoạn công phá trong mẫu:
Trong quá trình chưng cất (NH4)2SO4 tác dụng NaOH dư thừa và giải phóng ra NH3 :
Amoniac sinh ra sẽ được hấp thu bằng dung dịch axit boric tạo thành tetraborat amon. Sau đó chuẩn độ dung dịch tetraborat amon bằng H2SO4, NH3 được giải phóng và xác định được lượng nitơ theo các phản ứng sau:
Tính được nitơ có trong mẫu nhân với 6,25 sẽ quy ra được phần trăm protein thô. Chỉ số này tùy thuộc tỉ lệ của các hợp chất nitơ có trong protein, nói cách khác tùy thuộc vào nguồn gốc protein (ví dụ protein trong sữa 6,38, ngũ cốc 5,9, gelatin 5,55, hạt có dầu là 5,4). Tuy nhiên người ta thường dùng chỉ số chung là 6,25. b. Dụng cụ và hóa chất Máy chưng cất đạm Bình Kjeldahl Buret 25 mL Dung dịch H2O2 Acid H2SO4 đậm đặc Acid H2SO4 0,1N Dung dịch NaOH 40% Dung dịch axit boric
Dung dịch H2SO4 0,1N: pha một ống chuẩn H2SO4 với nước cất thành 1 L trong bình định mức.
Dung dịch NaOH 40%: pha 400g NaOH tinh thể với nước cất thành 1 L dung dịch.
Dung dịch axit boric: pha hỗn hợp 20g axit boric khan + 0,0065g Bromocresol green + 0,013g methyl red với nước cất thành 1 L dung dịch.
c. Cách tiến hành * Công phá đạm
1. Cân 0,15-0,2g mẫu cho vào ống nghiệm kjeldahl, đặc ống vào trong kệ nhôm.
2. Cho lần lượt vào ống 10 mL H2O2 và 10 mL H2SO4 đậm đặc, để yên 15 phút (quá trình này thực hiện trong tủ hút).
2NH3 + H2SO4 (NH4)2SO4 (NH4)2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2NH3 + 2H2O NH3 + H2O NH4OH + H+ 2NH4OH + 4H3BO3 (NH4)2B4O7 + 7H2O (NH4)2B4O7 + H2SO4 + 5H2O (NH4)2SO4 + 4H3BO3
3. Đặt cả kệ nhôm vào trong bộ phận công phá đạm, mở vòi nước, bật máy và chỉnh nhiệt độ ở 4 mức: 110oC trong 20 phút 200oC trong 20 phút 300oC trong 20 phút 370oC trong 20 phút
4. Tắt máy, khoảng 30 phút sau tắt nước, lấy kệ đỡ ra và chờ nguội hẳn. Nếu dung dịch trong ống nghiệm là màu trắng thì quá trình công phá đạm xảy ra hoàn toàn, nếu còn màu vàng thì thêm 5 mL H2O2 và lặp lại bước 3.
* Chưng cất
Kiểm tra NaOH và vòi nước trước khi chưng cất.
Tiến hành đặt ống Kjeldahl đã công phá và bình tam giác chứa 10 mL acid boric 2% vào hệ thống máy chưng cất.
Bật công tắt cho máy hoạt động. Hệ thống hoạt động khoảng 5 phút thì có tín hiệu dừng lại, dung dịch trong bình tam giác lúc này có màu xanh.
* Chuẩn độ
Lấy bình tam giác vừa chưng cất đem chuẩn độ bằng dung dịch H2SO4 0.1N trên ống buret. Cho từng giọt dung dịch H2SO4 nhỏ xuống bình tam giác kết hợp với lắc nhẹ cho đến khi dung dịch trong bình tam giác chuyển sang màu hồng nhạt thì quá trình chuẩn độ kết thúc, ghi kết quả thể tích H2SO4.
d. Tính kết quả % ( 0)*0,0014*100 m V V N %CP= %N* 6,25 (%CP: % protein thô) Trong đó:
V0 thể tích H2SO4 0,1N chuẩn độ mẫu không.
V thể tích H2SO4 0,1N chuẩn độ mẫu đang phân tích. m: số g mẫu.
0,0014 số g nitơ ứng với 1 mL H2SO4 0,1N dùng chuẩn độ.