CHƯƠNG 2 ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.1. Xác định thành phần loà
* Thu mẫu rêu, thảm lá, đất.
Các mẫu được thu theo ô tiêu chuẩn với diện tích mỗi ô là 1m2, mỗi ô
tiêu chuẩn lấy 5 mẫu gồm 4 góc và 1 mẫu ở giao điểm của 2 đường chéo.
Ở VQG Tam Đảo – Vĩnh Phúc, chúng tôi tiến hành thu mẫu tầng đất, tầng
rêu và thảm lá, định lượng theo các đai cao. Mẫu đất được lấy ở độ sâu 0-10cm và 11-20cm với kích thước của mỗi mẫu thu là 5x5x10cm. Đối với thảm lá
rừng phủ trên mặt đất, chúng tôi tiến hành gom tất cả lá mục, cành cây, xác
hữu cơ phủ trên mặt đất có diện tích (20cm x 20cm), đem cân và ghi lại trọng
lượng, sau đó tính trung bình để biết trên 1m2 diện tích có trọng lượng thảm lá
rừng là bao nhiêu. Đối với các mẫu thảm rêu mẫu định lượng là từ 200-300
-30-
từ 0 - 100cm trên mặt đất. Các mẫu này đều cân trọng lượng mỗi mẫu và tính
trung bình theo kg.
* Tách lọc mẫu Oribatida theo phương pháp phễu lọc “Berlese– Tullgren”
Dụng cụ dùng trong phương pháp này gồm có phễu thủy tinh và rây
lọc. Phễu thủy tinh có đường kính miệng là 18cm, đường kính vòi là 1,5cm.
Bộ phễu được đặt trong giá gỗ, vòi phễu gắn với ống nghiệm chứa dung dịch
formon 4%, bên trong có nhãn ghi thời gian đặt mẫu, địa điểm, tầng đất….
Rây lọc hình trụ đặt trên phễu, thành của rây lọc là vành kim loại, đường kính
15cm, cao 4cm, lưới lọc bằng sợi nilon, kích thước mắt lưới 2mm.
Sử dụng phương pháp truyền thống trong nghiên cứu khu hệ và sinh
thái động vật đất ở thực địa và trong phòng thí nghiệm theo Krivolutsky,
1975.
Các mẫu sau khi thu ở thực địa về, sẽ tiếp tục tiến hành tách động vật
chân khớp bé ra khỏi đất theo phương pháp phễu lọc “Berlese- Tullgren”, dựa
theo tập tính hướng đất dương và hướng sáng âm của động vật đất, trong thời
gian 7 ngày đêm, ở điều kiện nhiệt độ phòng thí nghiệm.
Để xử lý mẫu, bảo quản và định loại: Các ống nghiệm chứa động vật
thu được nhờ phễu “Berlese- Tullgren” sẽ được đổ trên giấy lọc đặt sẵn trong
đĩa petri để dưới kính lúp 2 mắt để nhặt riêng từng nhóm Oribatida. Các mẫu
Oribatida không làm tiêu bản, sẽ được cho vào trong ống nghiệm chứa dung
dịch định hình là formaldehyt 4%. Các ống nghiệm đều được gắn nhãn ghi
đầy đủ ngày thu mẫu, địa điểm...Toàn bộ tiêu bản định loại và các mẫu vật
được bảo quản tại Phòng Động vật, Khoa Sinh–KTNN, Đại học sư phạm Hà
-31-
Đặc điểm hình thái phân loại
Hình 2.3. Sơ đồ cấu trúc cơ thể của Oribatida ( Vũ Quang Mạnh, 2007) [8]
· Camerostoma là khoang che đôi kìm và phụ miệng.
· Prosoma là phần đầu ngực bao gồm cả 4 đôi đôi chân I, II, III và IV.
· Proterosoma là phần trước đầu ngực chỉ bao gồm 2 đôi chân trước.
· Hysterosoma là phần thân bao gồm cả vùng giáp hậu môn (AN),
giáp sinh dục (G) và 2 đôi chân sau.
· Opisthosoma là phần thân sau chỉ bao gồm vùng hậu môn – sinh dục.
· Prodorsum là tấm giáp đầu ngực;
· Notogaster là tấm giáp lưng.
· Abj, sej, dsej, và disj là các đường nối các phần khác nhau của cơ thể.
-32-
· Propodosoma là phần thân trước mang đôi chân I và II.
· Metapodosoma là phần thân giữa mang đôi chân III và IV.
· Podosoma là phần ngực bao gồm cả 4 đôi chân.
· Anogenital region là vùng hậu môn – sinh dục bao gồm giáp hậu
môn và giáp sinh dục.
Hình 2.4. Sơ đồ cấu trúc cơ thể và cấu tạo các cơ quan của Oribatida bậc cao a. Mặt lưng, b. Mặt bụng, c. Mặt bên ( Vũ Quang Mạnh, 2007) [8]
* Ro: Chóp đỉnh rostrum: ro, lm: Lông rostrum; tấm lamella.
* le, in, ss: Lông mọc trên lamella, lông interlamela, lông sensilus. * Bothridium: Gốc của lông sensilus.
-33-
* Tutorium: Tấm ki tin chìa ra nằm dưới và chạy song song với lamella. * Cuspis: phần đỉnh của tấm lamela chìa lên bề mặt cơ thể.
* Prolamela: Phần tấm kéo dài ở trước lamella, không chìa lên trên bề mặt cơ
thể.
* Mentotectum: tấm viền cằm; Pteromorpha: là tấm cánh nối với notogaster; Custodium là tấm kitin nhọn, chạy dài từ pd4 đến pd1; Discidium là tấm gốc
của custodium chìa bên mặt cơ thể, nằm ở phần gốc các chân Aa, A1, A2, A3
và Ah, Al là các đôi vùng lỗ thở mặt lưng và phía bên cơ thể; ; ta, te, ti, ms, r1, r2 , r3, pl, p2, p3, la, lm: Các lông notogaster ở ve giáp bậc cao.
* Aspis: Vùng sau chỏm nhọn rostrum ở nhóm ve giáp bậc thấp dạng
ptychoid.
* c1, c2, c3, cp, d1, d2, e1, e2, f1, f2, h1, h2, h3, ps1, ps2, ps3: Các lông
notogaster ở ve giáp bậc thấp; gla: Tuyến dầu nhờn; h: Lông dưới miệng; 1a, 1b, 1c, và 2a, 3a, 3b, 3c, và 4a, 4b, 4c, 4d: Các lông của epimeres 1, 2, 3 và 4; ap1, ap2, ap3, ap4, ap5, ap sej., ap.st.: Các mấu lồi trong apodemes; ep1, ep2, ep3, ep 4: Các gân cơ epimeres của gốc chân; pd1, pd2, pd3, pd4: Các tấm pedotecta phủ mặt trên của gốc các chân; ia, ih, im, ips, iad, ian: Các khe cắt lyrifissures.
* G, AG: Giáp sinh dục và giáp quanh sinh dục; g và ag: Các lông sinh dục và lông quanh sinh dục.
* AN, AD, PA: Giáp hậu môn, giáp quanh và giáp sau hậu môn.
* Anl, an2, an3, và ad1, ad2, ad3: Các lông hậu môn và lông quanh hậu môn.
Oribatida là nhóm chân khớp có kìm hình nhện (Athropoda:
Chelicerata), cơ thể của chúng thường phồng hình khối và được bao phủ bởi
vỏ kitin dày, tạo nên màu vàng nhạt đến lâu đen của nhóm Oribatida. Cơ thể
-34-
mang 6 đôi phần phụ, bao gồm 1 đôi kìm, 1 đôi chân xúc giác pedipalpi và 4
đôi chân bò.
* Định loại Oribatida.
Mẫu Oribatida, trước khi được định loại cần được tẩy màu, làm trong
vỏ kintin cứng. Quá trình làm trong màu có thể diễn ra trong một vài ngày
hoặc lâu hơn nên cần nhặt Oribatida riêng ra một lam kính lõm. Đưa lam kính
quan sát dưới kính lúp: dựa vào đặc điểm hình dạng ngoài, dùng kim tách sơ
bộ chúng thành nhóm có hình thù giống nhau riêng. Đặt lamel ở bên trái lam
kính sao cho chỉ phủ một phần chỗ lõm. Nếu dung dịch axit nhỏ vào chỗ lõm
dưới lamel chưa đầy cần bổ sung cho đầy. Dùng kim chuyển từng Oribatida
vào chỗ lõm dưới lamel để quan sát ở các tư thế khác nhau theo hướng lưng
và bụng và ngược lại. Khi mẫu ở đúng tư thế quan sát, ta chuyển sang ở kính
hiển vi.
Sau khi định loại xong, các loài được đo kích thước và chụp ảnh; tất
cả các cá thể cùng một loài để chung vào một ống nghiệm, dùng dung dịch
định hình bằng Formaldehyt 4%. Dùng giấy can ghi các thông số tên loài cần
thiết bằng bút chì rồi nút bằng bông không thấm nước; tất cả các ống nghiệm
được đặt chung vào lọ thuỷ tinh lớn chứa Formaldehyt 4% để bảo quản lâu
dài. Ghi tất cả các tên loài đã được định loại vào nhật ký phòng thí nghiệm. Danh sách các loài Oribatida được sắp xếp theo hệ thống cây chủng
loại phát sinh dựa theo hệ thống phân loại của Balogh J. và Balogh P.,
1992.[25] Các loài trong một giống được sắp xếp theo vần a, b, c. Định loại
tên loài theo các tài liệu phân loại, các khóa định loại của các tác giả: Vũ
Quang Mạnh, 2007[15]; Vũ Quang Mạnh, Đào Duy Trinh, 2006[13], tất cả
các mẫu Oribatida sau khi đã phân tích, xử lý và định loại đều đã được TS.
-35-