3.1.1. Kết quả hoàn thành test hành vi giao cấu qua các đợt tập luyện
Chuột đực được trải qua các đợt tập luyện để làm quen với test hành vi giao cấu.
Bảng 3.1. Khả năng hoàn thành test hành vi giao cấu của chuột theo các đợt ghép cặp Đợt 1 Đợt 2 Đợt 3 Đợt 4 Đợt 5 Đợt 6 Đợt 7 Tổng Số chuột hoàn thành 6 13 16 18 18 21 21 35 Tỷ lệ số chuột hoàn thành(%) 17,14 37,14 45,71 51,43 51,43 60 60 100% Nhận xét:
Số chuột hoàn thành test hành vi giao cấu tăng lên qua các đợt, có sự dao động lớn về số chuột hoàn thành test hành vi giao cấu ở các đợt tập luyện 1, 2 và 3; ở các đợt 4,5,6,7 tỉ lệ chuột hoàn thành hành vi giao cấu đã ổn định. Trong nghiên cứu hành vi tình dục, trước khi thử thuốc chuột cần được ghép cặp qua 7 đợt trong đó 3 đợt đầu (1,2,3) là 3 đợt để chuột làm quen với
test hành vi và khởi động phản xạ tình dục, 4 đợt sau (4,5,6,7) được dùng để đánh giá khả năng tình dục của chuột. Kết quả hoàn thành các đợt ghép cặp 4,5,6,7 của chuột được thể hiện ở bảng 3.2.
Bảng 3.2. Số chuột hoàn thành các test hành vi giao cấu
Số chuột hoàn thành test hành vi giao cấu Lô 3 đợt 2 đợt 1 đợt 0 đợt Tổng 1 3 1 1 4 9 2 4 2 0 3 9 3 3 2 1 3 9 Tổng 10 5 2 10 27 Nhận xét:
Số chuột hoàn thành cả 4 test hành vi giao cấu (4,5,6,7) chỉ chiếm khoảng 22,85% (8 trường hợp), còn lại 27 chuột không hoàn thành ít nhất 1 test hành vi được chia đều thành 3 lô nghiên cứu theo khả năng giao cấu.
3.1.2. Tác dụng của bài thuốc lên hành vi giao cấu của chuột
Tác dụng của bài thuốc lên các chỉ số ML, IL
Các chỉ số ML (thời gian đạt đến tiếp cận) và IL (thời gian đạt đến thâm nhập) là những chỉ số được dùng để đánh giá sự ham muốn của chuột.
Bảng 3.3. Tác dụng của bài thuốc lên các chỉ số ML và IL
NaCl 0,9% Ama Công 20,63mg/kg Ama Công 41,25mg/kg Trước uống thuốc 43,25 ± 15,17 17,70±8,86 10,56±2,76 Sau UT 2 giờ 54,33±33,25 29,60±12,95 50,13±19,93 ML(giây) Sau UT 7 ngày 145,71±56,13 94,88±45,36 169,00±63,38 Trước uống thuốc 242,57±71,23 88,25±29,68 198,00±112,69 Sau UT 2 giờ 216,11±116,5 66,00±24,70 170,75±54,07 IL(giây) Sau UT 7 ngày 218,71±65,90 160,22±35,57 319,00±133,22 Nhận xét:
- Ama Công liều 20,63mg/kg và 41,25mg/kg chưa làm thay đổi các chỉ số ML và IL một cách có ý nghĩa thống kê so với lô chứng sau 2 giờ hay 7 ngày dùng thuốc.
Tác dụng của bài thuốc lên các chỉ số IF và EL
Chỉ số IF (số lần thâm nhập âm đạo) gắn liền với hoạt động của dương vật, là tiền đề cho hiện tượng xuất tinh và phản ánh hiệu quả giao cấu hơn là sự ham muốn tình dục; EL là thời gian đạt đến xuất tinh.
Bảng 3.4. Tác dụng của bài thuốc lên các chỉ số IF và EL
NaCl 0,9% Ama Công 20,63mg/kg Ama Công 41,25mg/kg Trước uống thuốc 9,14±0,80 9,70±1,43 10,67±1,58 Sau UT 2 giờ 9,67±1,99 11,40±1,40 9,63±3,02 IF (lần) Sau UT 7 ngày 11,86±1,66 10,20±1,50 7,44±1,36 Trước uống thuốc 875,43±112,94 599,57±15,59 977,77±171,58 Sau UT 2 giờ 1098,57±173,64 806,14±209,36 731,83±162,12 EL (giây) Sau UT 7 ngày 1112,00±254,97 1014,33±153,72 545,50±150,10 Nhận xét:
- Ama Công liều 20,63mg/kg và 41,25mg/kg thể trọng chuột cống chưa làm thay đổi các chỉ số IF và EL một cách có ý nghĩa thống kê so với lô chứng sau 2 giờ hay 7 ngày dùng thuốc.
Tác dụng của bài thuốc lên các chỉ số PEI và III
Khoảng cách sau xuất tinh (PEI) là khoảng thời gian để chuột hồi sức lại sau mỗi loạt giao cấu cũng là một chỉ số đánh giá sự ham muốn tình
dục; khoảng cách thâm nhập dương vật III (=EL/IF) vừa phản ánh hiệu quả giao cấu vừa phản ánh ham muốn tình dục.
Bảng 3.5. Tác dụng của bài thuốc lên các chỉ số PEI và III
NaCl 0,9% Ama Công 20,63mg/kg Ama Công 41,25mg/kg Trước uống thuốc 442,57 ± 24,49 380,71 ±11,93 423,00 ± 26,63 Sau UT 2 giờ 412,57 ± 11,34 383,86 ± 16,39 (↑0,82%) pt-s <0,05 449,17 ± 31,81 PEI (giây) Sau UT 7 ngày 439,75 ± 19,42 428,83 ± 17,36 442,75 ± 39,99 Trước uống thuốc 105,85 ± 21,89 65,52 ± 10,39 99,25 ± 32,05 Sau UT 2 giờ 137,30 ± 50,44 84,46 ± 25,18 (↑28,91%) Pt-s <0,05 113,01 ± 20,47 III (giây) Sau UT 7 ngày 84,64 ± 27,37 116,09 ± 26,79 57,02 ± 9,38 Nhận xét:
- Ama Công liều 20,63mg/kg thể trọng chuột cống làm tăng cả chỉ số PEIvà III sau 2 giờ dùng thuốc một cách có ý nghĩa thống kê.
- Ama Công liều 40,25mg/kg thể trọng chuột cống chưa làm thay đổi các
chỉ số PEI và III một cách có ý nghĩa thống kê so với lô chứng.
3.2. Tác dụng của thuốc lên nồng độ testosteron máu
Nồng độ testosteron máu (nmol/L)
Biểu đồ 3.6.Sự thay đổi của testosteron máu dưới tác dụng của Ama Công liều 20,63mg/kg và 41,25mg/kg trong nghiên cứu hành vi giao cấu ở chuột cống đực
Nhận xét:
- Không có sự khác biệt về nồng độ testosteron máu của chuột cống đực giữa các lô dùng Ama Công liều 20,63mg/kg và 41,25mg/kg thể trọng chuột cống và lô chứng.
CHƯƠNG 4. BÀN LUẬN 4.1 . Về bài thuốc Ama Công
- Bài thuốc Ama Công được biết đến là một bài thuốc gia truyền của cụ Ama Công tên thật là Y Prông Êban – dũng sĩ săn voi số một Tây Nguyên với các công dụng dân gian chính là bồi bổ cơ thể, trị đau lưng nhức mỏi, bổ thận tráng dương, tăng cường sinh lực đã được bản thân ông và một bộ phận người dân tin tưởng sử dụng [5], [15].
- Từ năm 2005 đến nay với mục đích nhân giống, phát triển trồng trọt và bảo tồn bài thuốc theo nguyện vọng của cụ Ama Công, nhân dân cũng như chính quyền địa phương; bài thuốc đã được tiến hành nhiều nghiên cứu nhằm định danh cây thuốc, nghiên cứu chứng minh các tác dụng, cụ thể hơn như tác dụng tăng lực (gia tăng thời gian bơi kiệt sức); tác động lên thể trọng, thử độc tính cấp, bán trường diễn và cả tác động lên nồng độ testosteron, trọng lượng của các cơ quan sinh dục phụ [2], [3], [7], [14], [15].
- Liều Ama Công dùng trong thử nghiệm hành vi này được xác định dựa trên kết quả thử nghiệm hoạt tính androgen đã tiến hành trước đó : cao thuốc Ama Công trong 14 ngày ở cả 2 liều 37,5 mg/kg và 75 mg/kg khối lượng chuột nhắt bình thường đều làm tăng nồng độ testosteron máu (gấp 3 lần ở liều 37,5 mg/kg và gấp 6 lần ở liều 75 mg/kg thể trọng) và ở liều uống 75 mg/kg khối lượng trong 14 ngày làm tăng hàm lượng testosteron trong huyết tương trên cơ địa bị giảm năng sinh dục có ý nghĩa thống kê so với lô chứng[7].
Vậy, chúng tôi lựa chọn liều dùng để tiến hành thử nghiệm hành vi là:
37,50 mg/kg khối lượng chuột nhắt (1/100 Dmax )
( với Dmax = 3750 mg/kg, là liều tối đa cho bằng đường uống ) Quy đổi liều có hiệu quả tương đương trên đối tượng chuột cống là: [4]
20,63 mg/kg khối lượng chuột cống
41,25 mg/kg khối lượng chuột cống
4.2 . Về mô hình nghiên cứu
- Nghiên cứu trên hành vi tình dục ở chuột thực nghiệm đã được áp dụng rộng rãi trên thế giới để phân tích cơ chế , hành vi cũng như vai trò của hệ thần kinh trung ương - nội tiết đối với hoạt động sinh lý này. Trong lĩnh vực dược lý, nghiên cứu trên hành vi tình dục còn được dùng để sàng lọc các thuốc có tác dụng tăng cường sinh dục [17], [19], [21], [32]. Có thể kể tên 1 số các nghiên cứu về hành vi trên thế giới như: nghiên cứu của Ramachandran (2004) về tác dụng kích dục của dịch chiết Butea frondosan Koen.ex Roxb., [31]; nghiên cứu về vị thuốc
Dactylorhiza hatagirea ở Ấn Độ (2007) [26] hay nghiên cứu của
Tommy Pattij(2005) về sự khác biệt xuất tinh giữa các cá thể v.v…[30] Mô hình này không quá phức tạp và cần nhiều phương tiện, máy móc đắt tiền, hoàn toàn có thể áp dụng được trong điều kiện Việt Nam.
- Như đã được đề cập tới ở mục trên, kết quả thăm dò cho thấy Ama Công liều 75mg/kg khối lượng chuột nhắt làm tăng nồng độ testosteron máu một cách có ý nghĩa thống kê ở chuột suy sinh dục, mà theo Agmo (1997), bất cứ một yếu tố nào ảnh hưởng đến nồng độ testosteron máu đều có tác động đến hành vi giao cấu của chuột [17] nên thử nghiệm này được tiến hành với mong muốn nghiên cứu tác dụng của bài thuốc trên hành vi tình dục của chuột thực nghiệm, đặc biệt là trên ham muốn tình dục của chuột hay cụ thể là mong muốn thuốc sẽ làm giảm ML, IL, PEI, III hay làm tăng IF. Vì, trong các hoạt
động tình dục, hoạt động tiếp cận phản ánh sự mong muốn hay hoạt hóa tình dục, thông số thường được dùng để đánh giá là thời gian đạt đến tiếp cận (ML). Điều khiển hành vi tiếp cận là vai trò của hệ thần kinh trung ương, thông qua việc thay đổi các chất trung gian hóa học đặc hiệu hoặc nồng độ hormone giới tính đặc hiệu [13]. Ngoài ra, khoảng cách sau xuất tinh (PEI) là khoảng thời gian để chuột hồi sức lại sau mỗi loạt giao cấu cũng là một chỉ số đánh giá sự ham muốn tình dục. Hoạt động “thâm nhập” phức tạp hơn do cần có sự cương của dương vật, kết hợp với hoạt động của cơ vân ở dương vật nên không hoàn toàn là chỉ số đánh giá sự ham muốn tình dục. Sự cương dương vật cần có sự phối hợp tổng thể của hoạt động giãn mạch, các hormon nội tiết và yếu tố thần kinh. Vậy nên, hoạt động thâm nhập đặc trưng cho hiệu quả giao cấu. Các chỉ số đánh giá hiệu quả giao cấu là IF và III (=EL/IF), trong đó chỉ số IF rất quan trọng, nó gắn liền với hoạt động của dương vật, là tiền đề cho hiện tượng xuất tinh. Trong khi IF phản ánh hiệu quả giao cấu hơn là sự ham muốn tình dục thì III lại phản ánh cả [13].
4.3. Về kết quả nghiên cứu
- Ama Công liều 20,63mg/kg khối lượng chuột cống không làm thay đổi các chỉ số ML, IL, IF, EL sau 2 giờ hay 7 ngày dùng thuốc một cách có ý nghĩa thống kê so với lô chứng.
- Ama Công liều 20,63mg/kg khối lượng chuột cống không những làm giảm mà còn làm tăng các chỉ số PEI và III một cách có ý nghĩa thống kê sau 2 giờ dùng thuốc.
- Ama Công liều 41,25mg/kg khối lượng chuột cống không làm ảnh hưởng đến các chỉ số nghiên cứu.
- Ama Công liều 20,63mg/kg và 41,25 mg/kg khối lượng chuột cống chưa làm thay đổi nồng độ testosteron máu giữa các lô dùng thuốc so với lô chứng. Có sự phù hợp giữa kết quả về nồng độ testosteron máu và kết quả hành vi của bài thuốc.
Theo chúng tôi, kết quả này thu được một phần có thể do:
Hoạt tính androgen của bài thuốc Ama Công chưa đủ mạnh để có ảnh hưởng tích cực đến các chỉ số hành vi, đặc biệt là các chỉ số liên quan đến sự ham muốn tình dục (ML, IL). Qua những tài liệu chúng tôi tham khảo được, Ama Công liều 75mg/kg khối lượng chuột nhắt (tương đương với liều 40,25mg/kg thể trọng chuột cống) làm tăng trọng lượng nồng độ testosteron ở chuột suy sinh dục, song lại chưa làm tăng khối lượng các cơ quan sinh dục phụ một cách có ý nghĩa thống kê .
Trên thực tế quan sát, số chuột có biểu hiện bất thường về tư thế di chuyển (đi nghiêng) tăng dần theo thời gian nghiên cứu. Chúng tôi đặt ra giả thiết liệu chuột trải qua 9 đợt ghép cặp, mỗi đợt cách nhau 7 ngày có ảnh hưởng đến sức khỏe của chuột? Từ đó đưa ra cân nhắc rút ngắn thời gian nghiên cứu bằng cách rút ngắn số đợt ghép cặp hoặc khoảng cách giữa các đợt ghép cặp? Theo kết quả ở bảng 3.1 cho thấy chỉ có 17,14% chuột đực có hành vi tình dục ở đợt ghép cặp đầu tiên, nhưng đến đợt 2 con số này đã tăng lên gấp đôi. Như vậy, trước khi có những nghiên cứu chính thức, chuột đực cần phải được làm quen với test hành vi. Các test làm quen này không chỉ có vai trò khởi động phản xạ tình dục ở chuột, mà còn giúp các nghiên cứu viên làm quen với việc quan sát hành vi của chuột. Sau 1-2 test làm quen ban đầu, chuột phải tiếp tục được tập luyện qua các đợt ghép cặp mới. Mục đích của test tập luyện này nhằm phát
huy tối đa vai trò của hệ thần kinh và nội tiết đối với hành vi tình dục của chuột. Hoạt động tình dục của chuột phải dựa trên sự bình thường của các yếu tố thần kinh và nội tiết này, bất kỳ một sự bất thường nào của hệ thống trên đều dẫn đến việc chuột không hoàn thành test hành vi. Dựa vào kết quả của các đợt tập luyện này mà có thể phân loại chuột theo khả năng hoạt động tình dục [17], [28]. Tuy nhiên, cần tập luyện bao nhiêu đợt là vừa và khoảng cách giữa các đợt là bao lâu thì có sự khác nhau giữa các nghiên cứu. Ottani và cộng sự quan sát chuột qua 7 đợt ghép cặp trước khi tiến hành can thiệp bằng thuốc [28]. Hooi Hoon Ang chỉ cho ghép cặp trước 3 đợt mà thôi [18]. Khoảng cách giữa các đợt ghép cặp của Ottani và cộng sự là 4 ngày [28], trong khi Agmo khuyên có thể cách nhau 1 tuần [17]. Nghiên cứu của Tommy Pattij(2005) chuột trải qua 6 lần ghép cặp trước khi can thiệp thuốc và khoảng cách giữa các đợt cũng là 1 tuần [30]. Nghiên cứu về bài thuốc SA1 ở Hàn Quốc, gồm 9 vị dược liệu (Korean red ginseng, ferment soybean, Tribulus terrestris, Fructus Rubi, Fructus Lycii, Semen Cuscutae, Dioscorea Rhizome, Fructus Corni and Fructus Crataegi) được cho là làm tăng sinh lực và cải thiện chức năng tình dục cho nam giới, tác giả bày tỏ quan điểm các đợt quan sát cần thiết phải tiến hành 1-2 lần/1 tuần [29]. Vậy, theo chúng tôi các nghiên cứu sau có thể cân nhắc tiến hành ở các khoảng thời gian khác để đưa ra so sánh, từ đó rút ra khoảng thời gian thích hợp.
4.4. Về liều Ama Công
- Bài thuốc Ama Công đã được nghiên cứu về hoạt tính androgen ở nhiều mức liều khác nhau.
- Với Dmax = 3750mg (liều tối đa cho bằng đường uống), các nghiên cứu đã tiến hành ở các liều 1/10, 1/20 Dmax [7], cho kết quả là làm giảm nồng độ testosteron; tuy nhiên khi giảm liều xuống còn 1/50, 1/100 Dmax [14] thì kết quả ngược lại là làm tăng nồng độ testosteron. Nghiên cứu của chúng tôi cũng áp dụng liều 1/50 Dmax (41,25mg/kg chuột cống) và 1/100 Dmax (20,63mg/kg chuột cống) để đánh giá tác dụng trên hành vi tình dục. Kết quả cho thấy liều 1/50 Dmax không ảnh hưởng đến các chỉ số hành vi, còn liều 1/100 Dmax đã làm tăng các chỉ số PEI, III sau 2 giờ uống thuốc. Điều này có vẻ không tương xứng với hoạt tính androgen đã được nghiên cứu trước đó. Phải chăng liều 1/50 và 1/100 Dmax vẫn còn thấp, chưa đủ để tác động tích cực đến test hành vi. Nếu tăng liều lên đến mức liều 1/30, 1/40 Dmax liệu hành vi tình dục của chuột có được cải thiện không? Điều này cần tiếp tục nghiên cứu để làm sáng tỏ.
KẾT LUẬN
Qua quá trình nghiên cứu về tác dụng của bài thuốc Ama Công lên hành vi tình dục ở chuột cống đực thực nghiệm, khóa luận rút ra một số kết luận sau:
1. Về tác dụng của bài thuốc Ama Công lên hành vi tình dục của chuột cống đực thực nghiệm
- Ama Công với liều 20,63mg/kg và 41,25mg/kg cân nặng chuột cống chưa làm thay đổi tích cực đến hành vi tình dục của chuột cống đực thực nghiệm.
- Ama Công với liều 20,63mg/kg cân nặng chuột cống làm tăng PEI, III sau 2 giờ dùng thuốc và không làm thay đổi các chỉ số ML, IL, IF, EL.
- Ama Công với liều 41,25mg/kg cân nặng chuột cống chưa làm thay đổi các chỉ số hành vi.
2. Về tác dụng của bài thuốc Ama Công lên nồng độ testosteron máu của chuột cống đực thực nghiệm
- Ama Công với liều 20,63mg/kg và 41,25mg/kg cân nặng chuột cống chưa