giai đoạn phát triển của cây Dây thìa canh sau thu hái
Dược liệu được thu hái theo đúng giai đoạn và cách thức thu hái của đơn vị trồng trọt. Sử dụng phương pháp chiết ngâm lạnh chiết và tạo GS4, sau đó tiến hành định lượng GS4 bằng phương pháp cân.
2.3.2.1.Phương pháp thu hái dược liệu
Dược liệu thu hái để định lượng hàng tháng được thu hái tại cùng một khu đã được phân chia nhỏ thành 4 khu nhỏ hơn bao gồm các cây ở các giai đoạn phát triển khác nhau từ 1 đến 4 tháng sau thu hái. Nguyên liệu dùng để định lượng mỗi tháng là các cây ở giai đoạn 4 tháng sau thu hái. Thu hái toàn bộ các phần của cây nằm trên giàn.
Dược liệu thu hái để định lượng GS4 theo các giai đoạn phát triển của cây thì được thu hái theo các phần non và phần bánh tẻ.
2.3.2.2. Phương pháp chiết GS4 (1) Chuẩn bị nguyên liệu
Mẫu DTC thu hái hàng tháng được sấy ở 600C đến khô, sau đó được xay thành bột thô (2.000/355) (Hình 2.4). Cân chính xác khoảng 20g bột dược liệu, thấm ẩm dược liệu bằng dung môi chiết và để qua đêm.
A B
Hình 2.4 Nguyên liệu Dây thìa canh
A. Nguyên liệu sấy khô sau thu hái B. Nguyên liệu sau khi xay
(2) Tiến hành chiết
Lót một lớp bông thấm nước lên trên ống thoát dịch chiết để bột dược liệu không gây tắc bình và lẫn vào dịch chiết. Sau đó đặt giấy lọc đã cắt vừa vặn vào đáy bình. Cho từ từ bột dược liệu đã được làm ẩm vào bình, vừa cho vừa san đều và nén nhẹ. Đổ dung môi vào bình chiết cho tới khi có vài giọt chảy ra thì đóng khóa lại. Tiếp tục đổ dung môi tới cách mặt dược liệu 3-4cm
(100ml dung môi). Ngâm lạnh trong 24 giờ. Hết thời gian ngâm lạnh, rút dịch chiết. Lặp lại phương pháp 3 lần.
Tiến hành loại nhựa bằng cách đun cách thủy với Parafin rắn, khuấy đều rồi loại bỏ lớp Parafin.
Dịch chiết được gộp lại, đem cô cách thủy về cao lỏng 1 : 2.
+ Acid hóa về pH = 3 thu được tủa GS3. Để qua đêm. Lọc thu tủa. + Hòa tan tủa bằng dung dịch KOH 5% đến pH = 10. Acid hóa bằng H2SO4 5% đến pH = 3 thu được tủa GS4. Để qua đêm. Ly tâm lấy tủa.
2.3.2.3. Định lượng và tính toán kết quả
Tủa GS4 thu được đem sấy khô đến khối lượng không đổi ở 600C rồi đem cân khối lượng tủa.
Tính toán hàm lượng GS4. Hàm lượng Saponin toàn phần GS4 được tính theo công thức :
Trong đó : GS%: Hàm lượng GS4(%) m: Khối lượng GS4(g) M: Khối ượng dược liệu (g) x: Hàm ẩm dược liệu(%)
Mỗi mẫu làm 3 lần, lấy giá trị trung bình