3.3.1.1. Định tính alcaloid
Lấy 5g dược liệu hoặc 5g cao đặc. Mỗi loại cho vào bình nón 50ml, kiềm hóa bằng dung dịch NH4OH, đậy kín, để trong 30 phút. Thêm 20ml dung dịch CHCl3, lắc đều, ngâm trong 1 giờ. Lọc lấy CHCl3, lắc với dung dịch HCl 5% (3 15ml), gạn lấy dịch chiết nước, chia vào 3 ống nghiệm:
+ Ống 1: Nhỏ 2 - 3 giọt thuốc thử Mayer, phản ứng dương tính nếu xuất hiện kết tủa trắng.
+ Ống 2: Nhỏ 2 - 3 giọt thuốc thử Dragendoff, phản ứng dương tính nếu xuất hiện kết tủa da cam.
+ Ống 3: Nhỏ 2 - 3 giọt thuốc thử Bouchardat, phản ứng dương tính nếu xuất hiện kết tủa nâu đỏ.
Kết quả: cao đặc và Phụ tử cho phản ứng dương tính.. 3.3.1.2. Định tính saponin
- Lấy 5g dược liệu hoặc 5g cao đặc. Mỗi loại cho vào các bình nón, thêm 50 ml Ethanol 90%, đậy nắp, đun cách thủy khoảng 15 phút. Để lắng, lọc. Dịch lọc lắc với ether dầu hỏa (3 10 ml). Dịch chiết nước lắc với n-butanol (3 15 ml). Gộp dịch chiết n-butanol, cô cách thủy tới cắn. Hòa tan cắn trong 10 ml Ethanol làm phản ứng định tính.
+ Quan sát hiện tượng tạo bọt: lấy 1ml dịch chiết, thêm 10 ml nước cất, lắc mạnh 5 phút theo chiều dọc. Kết quả dương tính khi sau 15 phút cột bọt bền vững.
+ Phản ứng LieBermann - Burchardt: lấy 1ml dịch chiết, bốc hơi tới cắn, hòa cắn trong 1ml anhydrid acetic. Nghiêng ống 45o, nhỏ từ từ đồng lượng dd H2SO4 đặc (TT) theo thành ống. Phản ứng dương tính khi xuất hiện vòng đỏ tía giữa 2 lớp. + Phản ứng Salkowski: lấy 1ml dịch chiết, bốc hơi tới cắn, hòa cắn trong 1ml CHCl3. Nghiêng ống nghiệm 45o, nhỏ từ từ đồng lượng H2SO4 đặc (TT) theo thành ống. Phản ứng dương tính khi xuất hiện vòng đỏ tía giữa 2 lớp.
+ Phản ứng Rosenthaler: lấy 1ml dịch chiết cho vào ống nghiệm, thêm 2 giọt Vanilin 1% trong Ethanol, thêm 1 giọt dd HCl đặc, hơ nóng. Phản ứng dương tính khi lắc nhẹ thấy dung dịch xuất hiện màu vàng đậm.
Kết quả: phản ứng dương tính với cao đặc và Hoàng kỳ 3.3.1.3. Định tính flavonoid
- Lấy 5g dược liệu hoặc 5g cao đặc. Mỗi loại cho vào bình nón, thêm 25 ml cồn 90o, đun cách thủy sôi trong 10 phút, lọc nóng được dịch chiết cồn, đem làm phản ứng flavonoid.
+ Phản ứng Cyanidin: Cho vào ống nghiệm 2 ml dịch chiết cồn, 1 ít bột Mg và nhỏ
từ từ dung dịch HCl đặc (khoảng 3 giọt). Đun cách thủy trong 5 phút. Phản ứng dương tính nếu xuất hiện màu vàng nâu.
Kết quả: phản ứng dương tính với cao và 2 vị thuốc.
+ Phản ứng với FeCl3: Cho vào ống nghiệm 2 ml dịch chiết, thêm 2 - 3 giọt dung
dịch FeCl3 5 %. Phản ứng dương tính nếu xuất hiện màu xanh đen. Kết quả: phản ứng dương tính với cao và Phụ tử.
+ Phản ứng với chì acetate: Cho vào ống nghiệm 2 - 3 giọt dd chì acetate 0,5 %
(TT). Phản ứng dương tính nếu xuất hiện màu vàng. Kết quả: phản ứng dương tính với cao và Phụ tử.
+ Phản ứng với hơi amoniac: Nhỏ vài giọt dịch chiết cồn lên 1 miếng giấy lọc, hơ
khô rồi để lên lọ NH3 đậm đặc đã mở nút. Phản ứng dương tính nếu xuất hiện màu vàng đậm lên.
Kết quả: phản ứng dương tính với cao và 2 vị thuốc.. 3.3.1.4. Định tính polysacchaid, acid hữu cơ, đường khử
Cho 5 g bột dược liệu hoặc 5 g cao đặc vào ống nghiệm, thêm 15 ml nước cất. Đun sôi trực tiếp trong 10 phút. Để nguội, lọc, lấy dịch lọc làm phản ứng:
- Polysacchrid:
Đun cách thủy 2 ml dịch lọc với 0,5 ml thuốc thử Lugol trong vài phút. Phản ứng dương tính nếu dung dịch chuyển sang màu vàng.
- Acid hữu cơ:
Cho 2 ml dịch lọc vào ống nghiệm, thêm vào ít bột Na2CO3. Phản ứng dương tính nếu có bọt khí bay lên.
Kết quả: hai vị thuốc và cao đặc cho phản ứng dương tính..
- Đường khử:
Đun cách thủy 2 ml dịch lọc với 0,5 ml thuốc thử Fehling A và Fehling B trong vài phút. Phản ứng dương tính nếu có kết tủa màu đỏ gạch.
Kết quả: Phụ tử cho phản ứng dương tính. Hoàng kỳ và cao cho phản ứng âm tính. 3.3.1.5. Định tính acid amin (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Lấy 5g dược liệu hoặc 5g cao đặc, mỗi loại cho vào cốc 100, thêm 30 ml nước cất, đun sôi vài phút rồi lọc, thu dịch lọc.Lấy 2 ml dịch lọc, thêm vào 3 ml thuốc thử Ninhydrin 3 %, đun cách thủy trong 2 - 3 phút. Phản ứng dương tính nếu xuất hiện màu tím thẫm.
Kết quả: phản ứng dương tính với cao và hai vị thuốc. 3.3.1.6. Định tính tanin
- Lấy 2g cao đặc, 3g dược liệu. Mỗi loại cho vào cốc, thêm 20 ml nước cất, đun sôi vài phút rồi lọc, thu dịch lọc. Lấy 2 ml dịch lọc, thêm 5 giọt gelatin 1 %. Phản ứng dương tính nếu xuất hiện tủa bông trắng.
Kết quả: phản ứng âm tính với cao và 2 vị thuốc. 3.3.1.7. Định tính Coumarin
Đun cách thủy mỗi bình nón chứa 5g cao đặc hoặc 5g bột dược liệu với 30ml Ethanol 90%, lọc nóng qua giấy lọc, dịch lọc làm phản ứng:
- Phản ứng đóng mở vòng lacton:
Cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 2 ml dịch chiết. Ống 1 thêm 0,5 ml NaOH, ống 2 để yên. Đun cả 2 ống đến sôi, để nguội. Quan sát thấy: Ống 1 tủa đục, ống 2 trong. Thêm vào cả 2 ống nghiệm, mỗi ống 2 ml nước cất. Lắc đều, thấy: ống 1 trong suốt, ống 2 tủa đục. Kết quả: phản ứng âm tính với cao và 2 vị thuốc.
Nhỏ 3 giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc, nhỏ tiếp 3 giọt dung dịch NaOH 10 %, sấy nhẹ cho đến khô. Che 1 nửa diện tích bằng một miếng kim loại, soi đèn tử ngoại trong vài phút, bỏ miếng kim loại ra, thấy phần không bị che có huỳnh quang sáng hơn phần bị che. Nếu tiếp tục chiếu tia tử ngoại thì phần bị che sáng dần lên bằng phần bị che. Kết quả phản ứng âm tính với cao và 2 vị thuốc.
Kết quả sàng lọc các nhóm chất bằng phản ứng hóa học được trình bày ở Bảng 3.4. Bảng 3.4. Kết quả định tính cao đặc bài thuốc
STT Nhóm chất Phản ứng định tính Mẫu nghiên cứu
Cao Hoàng kỳ Phụ tử 1 Alcaloid TT Mayer ++ - ++ TT Bouchardat ++ - ++ TT Dragendoff ++ - ++ 2 Saponin
Hiện tượng tạo bọt ++ ++ -
Phản ứng Liebermann - Burchardt ++ ++ - Phản ứng Salkowski ++ ++ - Phản ứng Rosenthaler + + - 3 Favonoid Phản ứng Cyanidin ++ + ++ FeCl3 ++ - ++ Chì acetate ++ - + Hơi amoniac ++ + ++ 4 Polysaccharid TT Lugol ++ + +
5 Acid hữu cơ TT Na2CO3 ++ ++ ++
6 Acid amin TT Ninhydrin ++ ++ ++
7 Đƣờng khử Fehling A Fehling B - - ++
8 Tanin Gelatin 1 % - - -
9 Coumarin Đóng, mở vòng lacton - - -
Tăng huỳnh quang - - -
(-): phản ứng âm tính; (+): phản ứng dương tính; (++): phản ứng dương tính rõ
Nhận xét: Kết quả định tính sơ bộ các nhóm chất bằng hóa học cho thấy trong cao