3.6.3.1. Về cấu trúc sản phẩm phản ứng oxy hóa (nuciferin N-oxid)
Trên phổ khối lượng của sản phẩm phản ứng oxy hóa quan sát thấy pic phân tử là: [M+H]+ (m/z 312,20). Điều này phù hợp với công thức phân tử của sản phẩm nuciferin N-oxid là C19H21NO3 (M = 311,37).
Phổ hồng ngoại cho các giải hấp thụ đặc trưng phù hợp với cấu trúc của nuciferin N- oxid: C-H thơm có đỉnh hấp thụ đặc trưng tại 3043 cm-1; C=C thơm - tại 1634, 1578, 1527 và 1457 cm-1; C-O ether - tại 1219 cm-1; C-N+ - tại 1104 cm-1.
Trên phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton của sản phẩm phản ứng oxy hóa xuất hiện tín hiệu singlet đặc trưng của nhóm CH3 gắn với nguyên tử nitơ tại 3,65 ppm. Trong khi đó, giá trị này đối với nguyên liệu nuciferin nằm trong trường mạnh hơn là 2,47 ppm. Điều này chứng tỏ đã có phản ứng oxy hóa nuciferin tạo N-oxid, nguyên tử nitơ tồn tại ở dạng N+. Bộ tín hiệu của các nhóm gắn với nitơ này (C-5, C-6) đều cho độ chuyển dịch hóa học phù hợp: 3,70 và 4,20 ppm (H-5, -CH2-); 4,40 ppm (H-6, -CH- ). Các tín hiệu còn lại của khung nuciferin đều xuất hiện trên phổ. Trong đó, trong đó proton tại carbon số 11 (H-11) có độ chuyển dịch hóa học trong trường yếu nhất (8,27 ppm) dưới dạng doublet với hằng số tương tác 8,0 Hz (ortho với H-10). Proton thơm H-3 đứng độc lập - không tương tác với các vị trí xung quanh - nên cho tín hiệu singlet tại 6,64 ppm. Hai nhóm methyl gắn với oxy có độ chuyển dịch hóa học là 3,83 và 3,85 ppm. Do sản phẩm không ổn định trong quá trình bảo quản cũng như ghi phổ, nên trên phổ cũng quan sát thấy tín hiệu các tạp khác, trong đó có cả nuciferin. Đó là
các tín hiệu tại 8,32 ppm (doublet), 6,65 ppm (singlet), 3,53 ppm (singlet)... Dung môi cloroform cho tín hiệu tại 7,24 ppm.
Kết quả phân tích các phổ trên cho phép chúng tôi khẳng định sản phẩm thu được từ phản ứng oxy hóa nuciferin bằng H2O2 là nuciferin N-oxid.
3.6.3.2. Về cấu trúc sản phẩm phản ứng khử hóa (nuciferin)
Kết quả phân tích các phổ cho thấy sản phẩm thu được khi khử hóa nuciferin N-oxid chính là nuciferin.
3.6.3.3. Về cấu trúc sản phẩm phản ứng demethyl hóa (nornuciferin)
Trên phổ khối lượng của sản phẩm phản ứng demethyl hóa quan sát thấy pic phân tử là: [M+H]+ (m/z 282,1). Điều này phù hợp với công thức phân tử của sản phẩm nornuciferin là C18H19NO2 (M = 281,35).
Phổ hồng ngoại cho các giải hấp thụ đặc trưng phù hợp với cấu trúc của nornuciferin: N-H amin có đỉnh hấp thụ đặc trưng tại 3461 cm-1; C-H thơm - tại 3099 cm-1; C=C thơm - tại 1635 và 1569 cm-1; C-O ether - tại 1220 cm-1; C-N - tại 1107 cm-1.
Trên phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton của sản phẩm phản ứng demethyl hóa không quan sát thấy tín hiệu của nhóm methyl gắn trên nitơ (3 hydro tại 3,65 ppm đối với nuciferin N-oxid, hay 3 hydro 2,47 ppm đối với nuciferin). Trái lại, nhận thấy có tín hiệu singlet (1 hydro) tại 3,47 ppm. Mặt khác, các tín hiệu của 2 nhóm methyl gắn với oxy nhân thơm (H-1’, H-2’) vẫn còn ở trên phổ của sản phẩm (6 hydro singlet tại 3,83 và 3,88 ppm). Điều này chứng tỏ phản ứng demethyl hóa đã xảy ra trên nitơ và cho sản phẩm chứa nhóm NH có độ chuyển dịch hóa học là 3,47 ppm. Kết quả này phù hợp với cấu trúc của nornuciferin (N-nor-nuciferin).
Kết quả phân tích các phổ trên cho phép chúng tôi khẳng định sản phẩm thu được từ phản ứng demethyl nuciferin N-oxid bằng sắt sulfat là N-nornuciferin (nornuciferin).